高等学校化学学报
高等學校化學學報
고등학교화학학보
CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES
2012年
8期
1757-1764
,共8页
王静云%窦柏蕊%包永明%李森武
王靜雲%竇柏蕊%包永明%李森武
왕정운%두백예%포영명%리삼무
普鲁兰多糖%聚乙烯亚胺%绿色荧光蛋白表达质粒pGFP%非病毒基因载体
普魯蘭多糖%聚乙烯亞胺%綠色熒光蛋白錶達質粒pGFP%非病毒基因載體
보로란다당%취을희아알%록색형광단백표체질립pGFP%비병독기인재체
通过琥珀酸酐将低分子量支化聚乙烯亚胺(PEI,分子量1000)偶联到普鲁兰多糖(Pullulan)上,合成了新型基因载体P-PEI.利用1H NMR、FTIR、粒度仪、Zeta电位仪、透射电镜和凝胶电泳对聚阳离子载体及其与质粒pDNA的复合物进行了表征.凝胶阻滞实验结果证明,载体P-PEI在体外可以通过静电相互作用稳定结合pDNA,并能有效抑制DNA水解酶及血清成分对pDNA的降解.噻唑蓝(MTT)细胞毒性测试、绿色荧光蛋白表达质粒(pGFP)及荧光素酶表达质粒(pGL3)转染实验结果表明,载体P-PEI在N/P高达12.5时对细胞MCF-7,HeLa和COS-7的毒性低于PEI；当N/P为6.25时能有效将pGFP和pGL3带入Hela细胞并表达,最佳转染效率及荧光素酶活分别为[(36.67±0.25)％和(28.73±7.19)×108 RLU/mg蛋白,RLU为光强度],比Lipo 2000[(49.13±0.61)％,(58.47±7.62)×108 RLU/mg蛋白)略低.因此以Pullulan为骨架材料的P-PEI是一种新的有潜在应用价值的非病毒基因载体.
通過琥珀痠酐將低分子量支化聚乙烯亞胺(PEI,分子量1000)偶聯到普魯蘭多糖(Pullulan)上,閤成瞭新型基因載體P-PEI.利用1H NMR、FTIR、粒度儀、Zeta電位儀、透射電鏡和凝膠電泳對聚暘離子載體及其與質粒pDNA的複閤物進行瞭錶徵.凝膠阻滯實驗結果證明,載體P-PEI在體外可以通過靜電相互作用穩定結閤pDNA,併能有效抑製DNA水解酶及血清成分對pDNA的降解.噻唑藍(MTT)細胞毒性測試、綠色熒光蛋白錶達質粒(pGFP)及熒光素酶錶達質粒(pGL3)轉染實驗結果錶明,載體P-PEI在N/P高達12.5時對細胞MCF-7,HeLa和COS-7的毒性低于PEI；噹N/P為6.25時能有效將pGFP和pGL3帶入Hela細胞併錶達,最佳轉染效率及熒光素酶活分彆為[(36.67±0.25)％和(28.73±7.19)×108 RLU/mg蛋白,RLU為光彊度],比Lipo 2000[(49.13±0.61)％,(58.47±7.62)×108 RLU/mg蛋白)略低.因此以Pullulan為骨架材料的P-PEI是一種新的有潛在應用價值的非病毒基因載體.
통과호박산항장저분자량지화취을희아알(PEI,분자량1000)우련도보로란다당(Pullulan)상,합성료신형기인재체P-PEI.이용1H NMR、FTIR、립도의、Zeta전위의、투사전경화응효전영대취양리자재체급기여질립pDNA적복합물진행료표정.응효조체실험결과증명,재체P-PEI재체외가이통과정전상호작용은정결합pDNA,병능유효억제DNA수해매급혈청성분대pDNA적강해.새서람(MTT)세포독성측시、록색형광단백표체질립(pGFP)급형광소매표체질립(pGL3)전염실험결과표명,재체P-PEI재N/P고체12.5시대세포MCF-7,HeLa화COS-7적독성저우PEI；당N/P위6.25시능유효장pGFP화pGL3대입Hela세포병표체,최가전염효솔급형광소매활분별위[(36.67±0.25)％화(28.73±7.19)×108 RLU/mg단백,RLU위광강도],비Lipo 2000[(49.13±0.61)％,(58.47±7.62)×108 RLU/mg단백)략저.인차이Pullulan위골가재료적P-PEI시일충신적유잠재응용개치적비병독기인재체.
