中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
2001年
6期
487-496
,共10页
吴刚%崔海瑞%舒庆尧%叶恭银%夏英武%高明尉%I.Altosaar%李毅
吳剛%崔海瑞%舒慶堯%葉恭銀%夏英武%高明尉%I.Altosaar%李毅
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转基因水稻%crylAb基因%沉默%复活
轉基因水稻%crylAb基因%沉默%複活
전기인수도%crylAb기인%침묵%복활
以田间环境释放条件下农杆菌介导法转化而成的转crylAb基因水稻为研究对象,利用GUS组织化学染色法、Western杂交技术,在不抗虫转基因中8215株系后代中筛选到一个无Cry1Ab蛋白表达产物株系.分子杂交结果证实,转基因crylAb在中8215株系后代中发生了转录水平沉默,整合过程中基因重排使两个拷贝的ubiquitin启动子同时插入到水稻基因组中.甲基化分析证实ubiquitin启动子区域发生了甲基化,从而导致crylAb基因沉默.利用去甲基化试剂5-氮胞苷处理转基因沉默水稻种子,并在苗期、分蘖期、孕穗期、灌浆期及成熟期检测了其对沉默基因的复活效应,结果表明:5-氮胞苷处理使沉默的crylAb基因在灌浆期恢复表达活性,复活率约为8%～30%,且以低浓度(45 mg/L处理1,2 d)处理的复活率及恢复表达水平较高,复活基因表达的Cry1Ab蛋白最高可达可溶性总蛋白的0.147%.
以田間環境釋放條件下農桿菌介導法轉化而成的轉crylAb基因水稻為研究對象,利用GUS組織化學染色法、Western雜交技術,在不抗蟲轉基因中8215株繫後代中篩選到一箇無Cry1Ab蛋白錶達產物株繫.分子雜交結果證實,轉基因crylAb在中8215株繫後代中髮生瞭轉錄水平沉默,整閤過程中基因重排使兩箇拷貝的ubiquitin啟動子同時插入到水稻基因組中.甲基化分析證實ubiquitin啟動子區域髮生瞭甲基化,從而導緻crylAb基因沉默.利用去甲基化試劑5-氮胞苷處理轉基因沉默水稻種子,併在苗期、分蘗期、孕穗期、灌漿期及成熟期檢測瞭其對沉默基因的複活效應,結果錶明:5-氮胞苷處理使沉默的crylAb基因在灌漿期恢複錶達活性,複活率約為8%～30%,且以低濃度(45 mg/L處理1,2 d)處理的複活率及恢複錶達水平較高,複活基因錶達的Cry1Ab蛋白最高可達可溶性總蛋白的0.147%.
이전간배경석방조건하농간균개도법전화이성적전crylAb기인수도위연구대상,이용GUS조직화학염색법、Western잡교기술,재불항충전기인중8215주계후대중사선도일개무Cry1Ab단백표체산물주계.분자잡교결과증실,전기인crylAb재중8215주계후대중발생료전록수평침묵,정합과정중기인중배사량개고패적ubiquitin계동자동시삽입도수도기인조중.갑기화분석증실ubiquitin계동자구역발생료갑기화,종이도치crylAb기인침묵.이용거갑기화시제5-담포감처리전기인침묵수도충자,병재묘기、분얼기、잉수기、관장기급성숙기검측료기대침묵기인적복활효응,결과표명:5-담포감처리사침묵적crylAb기인재관장기회복표체활성,복활솔약위8%～30%,차이저농도(45 mg/L처리1,2 d)처리적복활솔급회복표체수평교고,복활기인표체적Cry1Ab단백최고가체가용성총단백적0.147%.
