CAJ | 학술논문

目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达GST/MKRN1融合蛋白,亲和层析分离纯化目的蛋白,进行动物免疫制备多克隆抗体.方法:MKRN1 cDNA全长1 449 bp,编码482个氨基酸残基.将其基因片段克隆到pGEX-4T-1载体上,获得pGEX-4T-1-MKRN1原核表达重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达,经谷胱甘肽Sepharose 4B介质填充的层析柱分离纯化蛋白,制备抗原免疫动物,得到pGEX-4T-1-MKRN1多克隆抗体.结果:ELISA结果显示血清抗体效价可达到1:256 000.通过Western免疫印迹及免疫细胞荧光分析,自制的多克隆抗体能特异地与MKRN1蛋白相互作用,可用于免疫细胞化学分析.结论:制备了效价和特异性良好的抗MKRN1多克隆抗体,经实验验证获得的免疫血清能够满足针对MKRN1的Western免疫印迹和细胞免疫组化检测的实验要求,为今后深入研究MKRN1表达的组织分布、细胞内定位及与端粒酶催化亚基(hTERT)之间相互作用的生物学意义提供了有用的实验工具.
목적:이용대장간균BL21(DE3)표체GST/MKRN1융합단백,친화층석분리순화목적단백,진행동물면역제비다극륭항체.방법:MKRN1 cDNA전장1 449 bp,편마482개안기산잔기.장기기인편단극륭도pGEX-4T-1재체상,획득pGEX-4T-1-MKRN1원핵표체중조질립,전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체,재대장간균표체계통중획득가용성표체,경곡광감태Sepharose 4B개질전충적층석주분리순화단백,제비항원면역동물,득도pGEX-4T-1-MKRN1다극륭항체.결과:ELISA결과현시혈청항체효개가체도1:256 000.통과Western면역인적급면역세포형광분석,자제적다극륭항체능특이지여MKRN1단백상호작용,가용우면역세포화학분석.결론:제비료효개화특이성량호적항MKRN1다극륭항체,경실험험증획득적면역혈청능구만족침대MKRN1적Western면역인적화세포면역조화검측적실험요구,위금후심입연구MKRN1표체적조직분포、세포내정위급여단립매최화아기(hTERT)지간상호작용적생물학의의제공료유용적실험공구.