广东药学院学报
廣東藥學院學報
엄동약학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY
2007年
2期
192-194,198
,共4页
赵晓蓉%戴文涛%王敏%彭吉林%黄韬%王国斌%伍钢%沈关心
趙曉蓉%戴文濤%王敏%彭吉林%黃韜%王國斌%伍鋼%瀋關心
조효용%대문도%왕민%팽길림%황도%왕국빈%오강%침관심
表皮生长因子受体%抗体库%单链抗体%肿瘤靶向
錶皮生長因子受體%抗體庫%單鏈抗體%腫瘤靶嚮
표피생장인자수체%항체고%단련항체%종류파향
目的 从大型人源抗体库Griffin 1中直接筛选出靶向EGFR的单链抗体.方法 以稳定转染的CHO-EGFR-GFP1细胞和未转染的CHO-K1细胞分别作为EGFR阳性和阴性细胞,采用负筛选的方法 进行筛选;通过比较每轮投入及洗脱出噬菌体的效价比以及细胞ELISA检测多克隆p-scFv与阳性、阴性细胞结合情况对筛选过程进行监测;采用菌落PCR挑选含有全长scFv片断的菌落,进一步用细胞ELISA检测单克隆p-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合特异性;挑选EGFR特异性单克隆p-scFv采用DNA测序法确定克隆多样性.结果 经过5轮筛选,细胞裂解液中洗脱出噬菌体效价有500倍以上增长;细胞ELISA结果 显示多克隆p-scFv与CHO-EGFR-GFP1细胞和CHO-K1细胞均有明显结合,但有部分特异性结合EGFR;菌落PCR显示约45%克隆中含有完整的1kb scFv片断;经细胞ELISA、 DNA测序检测共获得1株EGFR特异性单链抗体,命名为F4-scFv.结论 F4-scFv可与筛选中所用EGFR阳性细胞特异性结合,为进一步研制以此单链抗体为靶向分子的抗肿瘤药物奠定了基础.
目的 從大型人源抗體庫Griffin 1中直接篩選齣靶嚮EGFR的單鏈抗體.方法 以穩定轉染的CHO-EGFR-GFP1細胞和未轉染的CHO-K1細胞分彆作為EGFR暘性和陰性細胞,採用負篩選的方法 進行篩選;通過比較每輪投入及洗脫齣噬菌體的效價比以及細胞ELISA檢測多剋隆p-scFv與暘性、陰性細胞結閤情況對篩選過程進行鑑測;採用菌落PCR挑選含有全長scFv片斷的菌落,進一步用細胞ELISA檢測單剋隆p-scFv與EGFR暘性及陰性細胞結閤特異性;挑選EGFR特異性單剋隆p-scFv採用DNA測序法確定剋隆多樣性.結果 經過5輪篩選,細胞裂解液中洗脫齣噬菌體效價有500倍以上增長;細胞ELISA結果 顯示多剋隆p-scFv與CHO-EGFR-GFP1細胞和CHO-K1細胞均有明顯結閤,但有部分特異性結閤EGFR;菌落PCR顯示約45%剋隆中含有完整的1kb scFv片斷;經細胞ELISA、 DNA測序檢測共穫得1株EGFR特異性單鏈抗體,命名為F4-scFv.結論 F4-scFv可與篩選中所用EGFR暘性細胞特異性結閤,為進一步研製以此單鏈抗體為靶嚮分子的抗腫瘤藥物奠定瞭基礎.
목적 종대형인원항체고Griffin 1중직접사선출파향EGFR적단련항체.방법 이은정전염적CHO-EGFR-GFP1세포화미전염적CHO-K1세포분별작위EGFR양성화음성세포,채용부사선적방법 진행사선;통과비교매륜투입급세탈출서균체적효개비이급세포ELISA검측다극륭p-scFv여양성、음성세포결합정황대사선과정진행감측;채용균락PCR도선함유전장scFv편단적균락,진일보용세포ELISA검측단극륭p-scFv여EGFR양성급음성세포결합특이성;도선EGFR특이성단극륭p-scFv채용DNA측서법학정극륭다양성.결과 경과5륜사선,세포렬해액중세탈출서균체효개유500배이상증장;세포ELISA결과 현시다극륭p-scFv여CHO-EGFR-GFP1세포화CHO-K1세포균유명현결합,단유부분특이성결합EGFR;균락PCR현시약45%극륭중함유완정적1kb scFv편단;경세포ELISA、 DNA측서검측공획득1주EGFR특이성단련항체,명명위F4-scFv.결론 F4-scFv가여사선중소용EGFR양성세포특이성결합,위진일보연제이차단련항체위파향분자적항종류약물전정료기출.
