生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
377-380
,共4页
表达载体%表达盒%转录方向
錶達載體%錶達盒%轉錄方嚮
표체재체%표체합%전록방향
目的:研究质粒表达载体中2个表达单元间相互位置和转录方向关系对表达的影响,找出利于2个表达单元表达的优化的相互关系.方法:以全抗体为研究对象,构建了轻重链方向不同的2种相互关系的单质粒表达载体pIRESdhfrA和pIRESdhfrB,转染CHO-dhfr-细胞后,对瞬时表达水平进行了比较.以pIRESdhfrA和pIRESdhfrB为基础,构建了瞬时表达载体pIRESdhfrA-sv40ori和pIRESdhfrB-sv40ori,在COS-7细胞中进行了瞬时表达水平的比较.构建了基于CHO定点细胞系的稳定表达细胞株,对pIRESdhfrA和pIRESdhfrB进行稳定表达水平的比较.结果:在CHO-dhfr-的瞬时表达水平比较中,pIRESdhfrB转染的细胞表达水平是pIRESdhfrA转染细胞的2.18倍.与pIRESdhfrA-sv40ori在COS-7细胞的瞬时表达水平相比,pIRESdhfrB-sv40ori是其表达水平的2.3倍.pIRESdhfrB-FRT构建的CHO定点细胞平均表达水平是pIRESdhfrA-FRT构建的CHO定点细胞的11.6倍.结论:在构建的真核细胞质粒表达载体pIRESdhfr中,2个表达盒的启动子头-头转录方向关系比头-尾方向关系更利于重组蛋白的表达.
目的:研究質粒錶達載體中2箇錶達單元間相互位置和轉錄方嚮關繫對錶達的影響,找齣利于2箇錶達單元錶達的優化的相互關繫.方法:以全抗體為研究對象,構建瞭輕重鏈方嚮不同的2種相互關繫的單質粒錶達載體pIRESdhfrA和pIRESdhfrB,轉染CHO-dhfr-細胞後,對瞬時錶達水平進行瞭比較.以pIRESdhfrA和pIRESdhfrB為基礎,構建瞭瞬時錶達載體pIRESdhfrA-sv40ori和pIRESdhfrB-sv40ori,在COS-7細胞中進行瞭瞬時錶達水平的比較.構建瞭基于CHO定點細胞繫的穩定錶達細胞株,對pIRESdhfrA和pIRESdhfrB進行穩定錶達水平的比較.結果:在CHO-dhfr-的瞬時錶達水平比較中,pIRESdhfrB轉染的細胞錶達水平是pIRESdhfrA轉染細胞的2.18倍.與pIRESdhfrA-sv40ori在COS-7細胞的瞬時錶達水平相比,pIRESdhfrB-sv40ori是其錶達水平的2.3倍.pIRESdhfrB-FRT構建的CHO定點細胞平均錶達水平是pIRESdhfrA-FRT構建的CHO定點細胞的11.6倍.結論:在構建的真覈細胞質粒錶達載體pIRESdhfr中,2箇錶達盒的啟動子頭-頭轉錄方嚮關繫比頭-尾方嚮關繫更利于重組蛋白的錶達.
목적:연구질립표체재체중2개표체단원간상호위치화전록방향관계대표체적영향,조출리우2개표체단원표체적우화적상호관계.방법:이전항체위연구대상,구건료경중련방향불동적2충상호관계적단질립표체재체pIRESdhfrA화pIRESdhfrB,전염CHO-dhfr-세포후,대순시표체수평진행료비교.이pIRESdhfrA화pIRESdhfrB위기출,구건료순시표체재체pIRESdhfrA-sv40ori화pIRESdhfrB-sv40ori,재COS-7세포중진행료순시표체수평적비교.구건료기우CHO정점세포계적은정표체세포주,대pIRESdhfrA화pIRESdhfrB진행은정표체수평적비교.결과:재CHO-dhfr-적순시표체수평비교중,pIRESdhfrB전염적세포표체수평시pIRESdhfrA전염세포적2.18배.여pIRESdhfrA-sv40ori재COS-7세포적순시표체수평상비,pIRESdhfrB-sv40ori시기표체수평적2.3배.pIRESdhfrB-FRT구건적CHO정점세포평균표체수평시pIRESdhfrA-FRT구건적CHO정점세포적11.6배.결론:재구건적진핵세포질립표체재체pIRESdhfr중,2개표체합적계동자두-두전록방향관계비두-미방향관계경리우중조단백적표체.
