微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
3期
342-348
,共7页
杜爱庆%刁有祥%张伟%张瑞平%臧大鹏%刘芳娜
杜愛慶%刁有祥%張偉%張瑞平%臧大鵬%劉芳娜
두애경%조유상%장위%장서평%장대붕%류방나
胸膜肺炎放线杆菌%溶血毒素%克隆与表达%免疫保护
胸膜肺炎放線桿菌%溶血毒素%剋隆與錶達%免疫保護
흉막폐염방선간균%용혈독소%극륭여표체%면역보호
将猪胸膜肺炎放线杆菌血清3型分离株的ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA基因和血清5型分离株的ApxⅠA基因分别克隆到原核表达载体pGEX-5x-3,并在大肠杆菌BL21中进行表达.SDS-PAGE结果表明重组菌表达的最佳条件为诱导时间2小时和IPTG终浓度1mmol/L.通过硫酸铵盐析和Sephadex G-200凝胶过滤层析纯化表达产物.Western blot检测结果显示表达产物具有免疫活性.按照不同组合将表达产物与弗氏佐剂等比例混合,制备3种亚单位疫苗.并在30日龄和45日龄免疫小白鼠,在60日龄分别用血清1、3、5、7和10型胸膜肺炎放线杆菌攻毒.血清1、5和7型胸膜肺炎放线杆菌攻毒后,3种亚单位疫苗分别提供58.4%、66.6%和91.7%的保护率.试验结果表明重组蛋白具有免疫保护作用,且含有四种融合蛋白的亚单位疫苗免疫保护效果最佳.
將豬胸膜肺炎放線桿菌血清3型分離株的ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA基因和血清5型分離株的ApxⅠA基因分彆剋隆到原覈錶達載體pGEX-5x-3,併在大腸桿菌BL21中進行錶達.SDS-PAGE結果錶明重組菌錶達的最佳條件為誘導時間2小時和IPTG終濃度1mmol/L.通過硫痠銨鹽析和Sephadex G-200凝膠過濾層析純化錶達產物.Western blot檢測結果顯示錶達產物具有免疫活性.按照不同組閤將錶達產物與弗氏佐劑等比例混閤,製備3種亞單位疫苗.併在30日齡和45日齡免疫小白鼠,在60日齡分彆用血清1、3、5、7和10型胸膜肺炎放線桿菌攻毒.血清1、5和7型胸膜肺炎放線桿菌攻毒後,3種亞單位疫苗分彆提供58.4%、66.6%和91.7%的保護率.試驗結果錶明重組蛋白具有免疫保護作用,且含有四種融閤蛋白的亞單位疫苗免疫保護效果最佳.
장저흉막폐염방선간균혈청3형분리주적ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA기인화혈청5형분리주적ApxⅠA기인분별극륭도원핵표체재체pGEX-5x-3,병재대장간균BL21중진행표체.SDS-PAGE결과표명중조균표체적최가조건위유도시간2소시화IPTG종농도1mmol/L.통과류산안염석화Sephadex G-200응효과려층석순화표체산물.Western blot검측결과현시표체산물구유면역활성.안조불동조합장표체산물여불씨좌제등비례혼합,제비3충아단위역묘.병재30일령화45일령면역소백서,재60일령분별용혈청1、3、5、7화10형흉막폐염방선간균공독.혈청1、5화7형흉막폐염방선간균공독후,3충아단위역묘분별제공58.4%、66.6%화91.7%적보호솔.시험결과표명중조단백구유면역보호작용,차함유사충융합단백적아단위역묘면역보호효과최가.
