南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
4期
589-592
,共4页
周军%李建明%杨发达%柳玉红%丁彦青
週軍%李建明%楊髮達%柳玉紅%丁彥青
주군%리건명%양발체%류옥홍%정언청
CDH22%RNA干扰%慢病毒%结直肠癌
CDH22%RNA榦擾%慢病毒%結直腸癌
CDH22%RNA간우%만병독%결직장암
目的 构建人CDH22基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默大肠癌细胞的CDH22基因表达,为研究CDH22在大肠癌转移中参与的信号转导机制提供研究基础.方法 利用在线软件设计人CDH22基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序.得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组,获得真核表达慢病毒干扰载体.在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助质粒和CDH22基因重组慢病毒载体导入293FT细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染大肠癌细胞SW480,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰CDH22基因的细胞亚系.结果 成功构建CDH22真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒滴度为8×105U/ml.荧光定量PCR结果表明,所获得的细胞克隆11中CDH22 mRNA水平的表达显著降低.结论 成功构建出CDH22基因慢病毒RNAi表达载体,并获得CDH22基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系,为研究CDH22在大肠癌转移中的作用机制提供了研究基础.
目的 構建人CDH22基因RNA榦擾(RNAi)慢病毒載體,有效沉默大腸癌細胞的CDH22基因錶達,為研究CDH22在大腸癌轉移中參與的信號轉導機製提供研究基礎.方法 利用在線軟件設計人CDH22基因shRNA序列,閤成、退火形成雙鏈寡覈痠後剋隆到pENTRTM/U6載體的黏性末耑,測序.得到的暘性重組子再與慢病毒載體進行重組,穫得真覈錶達慢病毒榦擾載體.在脂質體的介導下將慢病毒包裝輔助質粒和CDH22基因重組慢病毒載體導入293FT細胞包裝病毒,測定病毒滴度,感染大腸癌細胞SW480,殺稻瘟菌素篩選穫得穩定榦擾CDH22基因的細胞亞繫.結果 成功構建CDH22真覈錶達慢病毒榦擾載體併穫得相應的慢病毒,病毒滴度為8×105U/ml.熒光定量PCR結果錶明,所穫得的細胞剋隆11中CDH22 mRNA水平的錶達顯著降低.結論 成功構建齣CDH22基因慢病毒RNAi錶達載體,併穫得CDH22基因穩定榦擾的大腸癌細胞亞繫,為研究CDH22在大腸癌轉移中的作用機製提供瞭研究基礎.
목적 구건인CDH22기인RNA간우(RNAi)만병독재체,유효침묵대장암세포적CDH22기인표체,위연구CDH22재대장암전이중삼여적신호전도궤제제공연구기출.방법 이용재선연건설계인CDH22기인shRNA서렬,합성、퇴화형성쌍련과핵산후극륭도pENTRTM/U6재체적점성말단,측서.득도적양성중조자재여만병독재체진행중조,획득진핵표체만병독간우재체.재지질체적개도하장만병독포장보조질립화CDH22기인중조만병독재체도입293FT세포포장병독,측정병독적도,감염대장암세포SW480,살도온균소사선획득은정간우CDH22기인적세포아계.결과 성공구건CDH22진핵표체만병독간우재체병획득상응적만병독,병독적도위8×105U/ml.형광정량PCR결과표명,소획득적세포극륭11중CDH22 mRNA수평적표체현저강저.결론 성공구건출CDH22기인만병독RNAi표체재체,병획득CDH22기인은정간우적대장암세포아계,위연구CDH22재대장암전이중적작용궤제제공료연구기출.
