水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2008年
4期
469-474
,共6页
王翔凌%杨先乐%张宁%喻文娟%胡鲲
王翔凌%楊先樂%張寧%喻文娟%鬍鯤
왕상릉%양선악%장저%유문연%호곤
反相高效液相色谱法%草鱼肝细胞%CYP2E1%氯唑沙宗%诱导
反相高效液相色譜法%草魚肝細胞%CYP2E1%氯唑沙宗%誘導
반상고효액상색보법%초어간세포%CYP2E1%록서사종%유도
CYP2E1为代谢大部分药物及环境中毒物的关键酶.以草鱼肝细胞(Ctenopharyngodon idellus hepatocyte)为反应体系,选取氯唑沙宗(CZX)为底物,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定其产物6-OH-氯唑沙宗(HCZX)的量,Lowry法测定肝细胞中蛋白的浓度从而反映CYP2E1活性,并采用该酶特异性诱导剂乙醇对其进行诱导,观察其酶活变化及CZX在细胞中代谢情况.结果表明,CZX在草鱼肝细胞中的基础代谢较低,经过对CYP2E1诱导条件的优化及筛选,得到最佳诱导剂剂量为4μg/mL、诱导时间为24h、底物浓度为50μg/mL并且孵育时间为1h时,其酶活达到最高.约为0.47μg/min·mg.对照组和诱导组的草鱼肝细胞中CZX的消除半衰期(t1/2)分别为202.10h和28.75h,差异极显著,表明乙醇诱导的CYP2E1能够加快底物的代谢.酶促反应动力学参数表明乙醇诱导的CYP2E1与底物的亲和力较高,酶促反应强度较大.该结果能够为CYP2E1代谢的药物及环境毒物的研究提供理论依据.
CYP2E1為代謝大部分藥物及環境中毒物的關鍵酶.以草魚肝細胞(Ctenopharyngodon idellus hepatocyte)為反應體繫,選取氯唑沙宗(CZX)為底物,採用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定其產物6-OH-氯唑沙宗(HCZX)的量,Lowry法測定肝細胞中蛋白的濃度從而反映CYP2E1活性,併採用該酶特異性誘導劑乙醇對其進行誘導,觀察其酶活變化及CZX在細胞中代謝情況.結果錶明,CZX在草魚肝細胞中的基礎代謝較低,經過對CYP2E1誘導條件的優化及篩選,得到最佳誘導劑劑量為4μg/mL、誘導時間為24h、底物濃度為50μg/mL併且孵育時間為1h時,其酶活達到最高.約為0.47μg/min·mg.對照組和誘導組的草魚肝細胞中CZX的消除半衰期(t1/2)分彆為202.10h和28.75h,差異極顯著,錶明乙醇誘導的CYP2E1能夠加快底物的代謝.酶促反應動力學參數錶明乙醇誘導的CYP2E1與底物的親和力較高,酶促反應彊度較大.該結果能夠為CYP2E1代謝的藥物及環境毒物的研究提供理論依據.
CYP2E1위대사대부분약물급배경중독물적관건매.이초어간세포(Ctenopharyngodon idellus hepatocyte)위반응체계,선취록서사종(CZX)위저물,채용반상고효액상색보(RP-HPLC)법측정기산물6-OH-록서사종(HCZX)적량,Lowry법측정간세포중단백적농도종이반영CYP2E1활성,병채용해매특이성유도제을순대기진행유도,관찰기매활변화급CZX재세포중대사정황.결과표명,CZX재초어간세포중적기출대사교저,경과대CYP2E1유도조건적우화급사선,득도최가유도제제량위4μg/mL、유도시간위24h、저물농도위50μg/mL병차부육시간위1h시,기매활체도최고.약위0.47μg/min·mg.대조조화유도조적초어간세포중CZX적소제반쇠기(t1/2)분별위202.10h화28.75h,차이겁현저,표명을순유도적CYP2E1능구가쾌저물적대사.매촉반응동역학삼수표명을순유도적CYP2E1여저물적친화력교고,매촉반응강도교대.해결과능구위CYP2E1대사적약물급배경독물적연구제공이론의거.
