CAJ | 학술논문

背景与目的:已有研究发现NSC67657和全反式维甲酸可以诱导HL-60细胞分别向单核系和粒系分化.本研究比较分析不同诱导剂诱导HL-60细胞向单核系和粒系分化前后以及分化中的蛋白表达差异,发现与单核系和粒系分化有关的关键蛋白.方法:分别采用粒系分化诱导剂全反式维甲酸和单核系分化诱导剂NSC67657诱导HL-60细胞分化,MTT法检测细胞增殖情况:流式细胞技术分析细胞表面特异性分化抗原(CD11b/CD14)的表达,根据CD14表达情况计算细胞分化百分率;细胞化学染色对HL-60的两系分化进行验证.改良双向电泳分离技术对HL-60细胞全蛋白进行分离,PDQuest软件分析寻找差异蛋白点.基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对蛋白点进行分析.RT-PCR和免疫印迹对差异蛋白ICAT进行验证.结果:全反式维甲酸和NSC67657均抑制HL-60细胞增殖,并分别诱导HL-60细胞向粒系和单核系分化.在2μmol/L ATRA和10 μmol/L NSC67657作用5 d后,CD11b和CD14的表达均在90%以上,细胞化学染色支持细胞两系分化的结论.蛋白质组学分析表明,HL-60细胞分别向粒系和单核系分化后.有25个差异蛋白点的变化趋势在两系分化中是相同的,有10个差异蛋白点在单核系分化后表达有差异.有15个差异蛋白点在粒系分化后表达有差异;ICAT是其中差异蛋白之一,通过基因和蛋白水平验证,发现ICAT在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化过程中表达升高,而在粒系和非处理细胞中表达无显著性差异.结论:双向电泳/MOLDI-TOF MS对HL-60细胞分化前后细胞全蛋白进行分析,发现了一批与两系分化有关的蛋白分子,为关键蛋白的筛选及其功能研究提供了重要的启示.
배경여목적:이유연구발현NSC67657화전반식유갑산가이유도HL-60세포분별향단핵계화립계분화.본연구비교분석불동유도제유도HL-60세포향단핵계화립계분화전후이급분화중적단백표체차이,발현여단핵계화립계분화유관적관건단백.방법:분별채용립계분화유도제전반식유갑산화단핵계분화유도제NSC67657유도HL-60세포분화,MTT법검측세포증식정황:류식세포기술분석세포표면특이성분화항원(CD11b/CD14)적표체,근거CD14표체정황계산세포분화백분솔;세포화학염색대HL-60적량계분화진행험증.개량쌍향전영분리기술대HL-60세포전단백진행분리,PDQuest연건분석심조차이단백점.기질보조격광해흡-비행시간질보(MALDI-TOF MS)대단백점진행분석.RT-PCR화면역인적대차이단백ICAT진행험증.결과:전반식유갑산화NSC67657균억제HL-60세포증식,병분별유도HL-60세포향립계화단핵계분화.재2μmol/L ATRA화10 μmol/L NSC67657작용5 d후,CD11b화CD14적표체균재90%이상,세포화학염색지지세포량계분화적결론.단백질조학분석표명,HL-60세포분별향립계화단핵계분화후.유25개차이단백점적변화추세재량계분화중시상동적,유10개차이단백점재단핵계분화후표체유차이.유15개차이단백점재립계분화후표체유차이;ICAT시기중차이단백지일,통과기인화단백수평험증,발현ICAT재NSC67657유도HL-60세포단핵계분화과정중표체승고,이재립계화비처리세포중표체무현저성차이.결론:쌍향전영/MOLDI-TOF MS대HL-60세포분화전후세포전단백진행분석,발현료일비여량계분화유관적단백분자,위관건단백적사선급기공능연구제공료중요적계시.