饲料工业
飼料工業
사료공업
FEED INDUSTRY
2009年
6期
30-32
,共3页
胡长浩%邹有土%刘燕雅%冯蔚宗%林琳
鬍長浩%鄒有土%劉燕雅%馮蔚宗%林琳
호장호%추유토%류연아%풍위종%림림
扩展青霉脂肪酶%随机突变%最适作用温度
擴展青黴脂肪酶%隨機突變%最適作用溫度
확전청매지방매%수궤돌변%최괄작용온도
利用error-prone PCR和staggered extension process(StEP)相结合的方法对扩展青霉脂肪酶(PEL)进行定向进化,构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-mutantx,电转化引入毕赤酵母GS115中,进行异源表达.高通量筛选获得一株最适作用温度比野生型提高了5℃的突变株.15%的SDS-PAGE表明突变体分子量与野生型一致,约为28 kDa.基因测序结果表明,突变体第270位丙氨酸变为苏氨酸,后者是氢键的供体,能形成具有稳定空间结构的氢键,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合.
利用error-prone PCR和staggered extension process(StEP)相結閤的方法對擴展青黴脂肪酶(PEL)進行定嚮進化,構建含有隨機突變基因的重組質粒pPIC3.5K-lip-mutantx,電轉化引入畢赤酵母GS115中,進行異源錶達.高通量篩選穫得一株最適作用溫度比野生型提高瞭5℃的突變株.15%的SDS-PAGE錶明突變體分子量與野生型一緻,約為28 kDa.基因測序結果錶明,突變體第270位丙氨痠變為囌氨痠,後者是氫鍵的供體,能形成具有穩定空間結構的氫鍵,使酶結構更加穩定,在高溫下更適于與底物結閤.
이용error-prone PCR화staggered extension process(StEP)상결합적방법대확전청매지방매(PEL)진행정향진화,구건함유수궤돌변기인적중조질립pPIC3.5K-lip-mutantx,전전화인입필적효모GS115중,진행이원표체.고통량사선획득일주최괄작용온도비야생형제고료5℃적돌변주.15%적SDS-PAGE표명돌변체분자량여야생형일치,약위28 kDa.기인측서결과표명,돌변체제270위병안산변위소안산,후자시경건적공체,능형성구유은정공간결구적경건,사매결구경가은정,재고온하경괄우여저물결합.
