安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2010年
2期
161-164
,共4页
邢昕%刘晓颖%武标%汪云飞%朱恒锐%范礼斌
邢昕%劉曉穎%武標%汪雲飛%硃恆銳%範禮斌
형흔%류효영%무표%왕운비%주항예%범례빈
基因表达%转染%印迹法,蛋白质%哺乳动物
基因錶達%轉染%印跡法,蛋白質%哺乳動物
기인표체%전염%인적법,단백질%포유동물
目的 构建带Flag标签的phb1真核表达载体,将其转染至COS7细胞中观察phb1蛋白在细胞内的定位,并转染至HEK293T细胞检测其表达.方法 以含人phb1全长cDNA序列的质粒pLenti6-phb1为模板,用PCR方法扩增phb1全长序列,连接至T载体,构建pUCm-T-phb1,Kpn Ⅰ和EcoR I双酶切后插入真核表达载体pCDNA3中,将重组表达质粒pCDNA3-Flag-phb1转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位.转染至HEK2931、细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测.结果 经测序鉴定,成功构建了真核表达载体pCDNA3-Flag-phb1,转染后荧光显微镜观察phb1在COS7细胞中主要定位于胞质;经Western blot检测phb1基因在HEK293T细胞中能够有效表达.结论 实验结果为进一步了解phb1的功能打下了基础.
目的 構建帶Flag標籤的phb1真覈錶達載體,將其轉染至COS7細胞中觀察phb1蛋白在細胞內的定位,併轉染至HEK293T細胞檢測其錶達.方法 以含人phb1全長cDNA序列的質粒pLenti6-phb1為模闆,用PCR方法擴增phb1全長序列,連接至T載體,構建pUCm-T-phb1,Kpn Ⅰ和EcoR I雙酶切後插入真覈錶達載體pCDNA3中,將重組錶達質粒pCDNA3-Flag-phb1轉染至COS7細胞,在熒光顯微鏡下觀察其細胞定位.轉染至HEK2931、細胞,提取總蛋白,進行Western blot檢測.結果 經測序鑒定,成功構建瞭真覈錶達載體pCDNA3-Flag-phb1,轉染後熒光顯微鏡觀察phb1在COS7細胞中主要定位于胞質;經Western blot檢測phb1基因在HEK293T細胞中能夠有效錶達.結論 實驗結果為進一步瞭解phb1的功能打下瞭基礎.
목적 구건대Flag표첨적phb1진핵표체재체,장기전염지COS7세포중관찰phb1단백재세포내적정위,병전염지HEK293T세포검측기표체.방법 이함인phb1전장cDNA서렬적질립pLenti6-phb1위모판,용PCR방법확증phb1전장서렬,련접지T재체,구건pUCm-T-phb1,Kpn Ⅰ화EcoR I쌍매절후삽입진핵표체재체pCDNA3중,장중조표체질립pCDNA3-Flag-phb1전염지COS7세포,재형광현미경하관찰기세포정위.전염지HEK2931、세포,제취총단백,진행Western blot검측.결과 경측서감정,성공구건료진핵표체재체pCDNA3-Flag-phb1,전염후형광현미경관찰phb1재COS7세포중주요정위우포질;경Western blot검측phb1기인재HEK293T세포중능구유효표체.결론 실험결과위진일보료해phb1적공능타하료기출.
