CAJ | 학술논문

为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原.采用RT-PCR的方法,用TMV外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,克隆到的基因序列进行分析,并使其在大肠杆菌中表达.结果表明,从该样品中扩增到了TMV的CP基因,说明该样品受到TMV的侵染,首次发现TMV自然侵染南瓜.对CP基因序列测定及分析表明,与GenBank上其他TMV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为86.5%～99.0%,推导的氨基酸序列同源性为93.7%～99.4%.根据完整CP 基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:32个TMV分离物可分为5个组,其中TMV-liaocheng与Nakron Pathom、Fujian、017等分离物属于Ⅳ组.TMV-liaocheng可能发生过重组.将TMV-liaocheng CP基因与原核表达载体pET-22b(+)连接,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS诱导表达出分子量约20 kDa的融合蛋白,并用Ni2+ -NTA His · Bind(R)树脂纯化,纯化后的蛋白可直接用于制备特异性的抗血清,为准确、快速地检测TMV奠定了基础.
위종분자수평감정산동료성적일표현명현화협、황화、궐협급과실기형적남과병독병적병원.채용RT-PCR적방법,용TMV외각단백(CP)기인적특이인물,대해양품진행료검측,극륭도적기인서렬진행분석,병사기재대장간균중표체.결과표명,종해양품중확증도료TMV적CP기인,설명해양품수도TMV적침염,수차발현TMV자연침염남과.대CP기인서렬측정급분석표명,여GenBank상기타TMV분리물CP기인핵감산서렬적동원성위86.5%～99.0%,추도적안기산서렬동원성위93.7%～99.4%.근거완정CP 기인핵감산서렬구건적계통진화수현시:32개TMV분리물가분위5개조,기중TMV-liaocheng여Nakron Pathom、Fujian、017등분리물속우Ⅳ조.TMV-liaocheng가능발생과중조.장TMV-liaocheng CP기인여원핵표체재체pET-22b(+)련접,재대장간균BL21(DE3)pLysS유도표체출분자량약20 kDa적융합단백,병용Ni2+ -NTA His · Bind(R)수지순화,순화후적단백가직접용우제비특이성적항혈청,위준학、쾌속지검측TMV전정료기출.