浙江中医药大学学报
浙江中醫藥大學學報
절강중의약대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
2011年
2期
218-221,225
,共5页
杜文喜%童培建%吴承亮%方剑利%姜月艳%刘慧
杜文喜%童培建%吳承亮%方劍利%薑月豔%劉慧
두문희%동배건%오승량%방검리%강월염%류혜
大鼠%ATPase a3基因%RNA干扰%慢病毒
大鼠%ATPase a3基因%RNA榦擾%慢病毒
대서%ATPase a3기인%RNA간우%만병독
[目的]设计、筛选大鼠破骨细胞(osteoclast,OC)骨吸收关键基因ATPase a3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)并构建其慢病毒表达载体,为研究以OC亢进的骨代谢疾病莫定基础.[方法]设计ATPase a3基因shRNA序列并合成小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)结构的DNA,退火形成双链DNA,与经Hpa I和Xho I酶切慢病毒pGCL-GFP载体连接,构建成携带ATPase a3-shRNA慢病毒质粒载体(pGCL-ATPase a3-shRNA),PCR及测序鉴定后,Western blot筛选出携带最佳siRNA的慢病毒质粒载体,并利用慢病毒包装质粒(pHelper 1.0和pHelper 2.0)将其制备成ATPase a3-shRNA慢病毒,并测定病毒滴度.[结果]成功构建出ATPase a3-shRNA慢病毒载体,Western blot筛选出携带最佳siRNA片段,并将其成功包装成5×108Tu.mL-1滴度的ATPase a3-shRNA慢病毒.[结论]成功构建大鼠ATPase a3基因RNAi慢病毒.
[目的]設計、篩選大鼠破骨細胞(osteoclast,OC)骨吸收關鍵基因ATPase a3小榦擾RNA(small interfering RNA,siRNA)併構建其慢病毒錶達載體,為研究以OC亢進的骨代謝疾病莫定基礎.[方法]設計ATPase a3基因shRNA序列併閤成小髮卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)結構的DNA,退火形成雙鏈DNA,與經Hpa I和Xho I酶切慢病毒pGCL-GFP載體連接,構建成攜帶ATPase a3-shRNA慢病毒質粒載體(pGCL-ATPase a3-shRNA),PCR及測序鑒定後,Western blot篩選齣攜帶最佳siRNA的慢病毒質粒載體,併利用慢病毒包裝質粒(pHelper 1.0和pHelper 2.0)將其製備成ATPase a3-shRNA慢病毒,併測定病毒滴度.[結果]成功構建齣ATPase a3-shRNA慢病毒載體,Western blot篩選齣攜帶最佳siRNA片段,併將其成功包裝成5×108Tu.mL-1滴度的ATPase a3-shRNA慢病毒.[結論]成功構建大鼠ATPase a3基因RNAi慢病毒.
[목적]설계、사선대서파골세포(osteoclast,OC)골흡수관건기인ATPase a3소간우RNA(small interfering RNA,siRNA)병구건기만병독표체재체,위연구이OC항진적골대사질병막정기출.[방법]설계ATPase a3기인shRNA서렬병합성소발잡RNA(short hairpin RNA,shRNA)결구적DNA,퇴화형성쌍련DNA,여경Hpa I화Xho I매절만병독pGCL-GFP재체련접,구건성휴대ATPase a3-shRNA만병독질립재체(pGCL-ATPase a3-shRNA),PCR급측서감정후,Western blot사선출휴대최가siRNA적만병독질립재체,병이용만병독포장질립(pHelper 1.0화pHelper 2.0)장기제비성ATPase a3-shRNA만병독,병측정병독적도.[결과]성공구건출ATPase a3-shRNA만병독재체,Western blot사선출휴대최가siRNA편단,병장기성공포장성5×108Tu.mL-1적도적ATPase a3-shRNA만병독.[결론]성공구건대서ATPase a3기인RNAi만병독.
