华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2011年
5期
71-75
,共5页
王淑娟%陈红英%魏战勇%刘金朋%耿静微%崔保安
王淑娟%陳紅英%魏戰勇%劉金朋%耿靜微%崔保安
왕숙연%진홍영%위전용%류금붕%경정미%최보안
猪白细胞介素-2%克隆%重组禽痘病毒%载体%构建
豬白細胞介素-2%剋隆%重組禽痘病毒%載體%構建
저백세포개소-2%극륭%중조금두병독%재체%구건
采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2),RT-PCR产物进行T-A克隆并测序,获得了猪IL-2基因序列.将BamH Ⅰ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamH Ⅰ酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入的重组质粒pSY538/pIL-2.NotⅠ酶切pSY538/pIL-2后,得到含有双启动子LP2和EP2的猪IL-2基因片段,将其亚克隆到含有LacZ基因的pSY681载体上,筛选正向插入的重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2.测序结果表明,克隆的豫南黑猪IL-2基因长482 bp,包含1个完整读码框(465 bp),与GenBank 中其他5条猪IL-2基因核苷酸同源性为99.9％.重组质粒pSY681/pIL-2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确.成功构建了重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2,为猪IL-2生物学功能的进一步研究和开发奠定基础.
採用RT-PCR技術自豫南黑豬脾淋巴細胞中擴增豬IL-2基因(pIL-2),RT-PCR產物進行T-A剋隆併測序,穫得瞭豬IL-2基因序列.將BamH Ⅰ酶切的豬IL-2基因非定嚮剋隆到BamH Ⅰ酶切併去燐痠化的pSY538載體上,通過PCR、酶切和測序鑒定,篩選正嚮插入的重組質粒pSY538/pIL-2.NotⅠ酶切pSY538/pIL-2後,得到含有雙啟動子LP2和EP2的豬IL-2基因片段,將其亞剋隆到含有LacZ基因的pSY681載體上,篩選正嚮插入的重組禽痘病毒轉移質粒pSY681/pIL-2.測序結果錶明,剋隆的豫南黑豬IL-2基因長482 bp,包含1箇完整讀碼框(465 bp),與GenBank 中其他5條豬IL-2基因覈苷痠同源性為99.9％.重組質粒pSY681/pIL-2經酶切、測序鑒定,證實含有目的片段,且連接、構建正確.成功構建瞭重組禽痘病毒轉移質粒pSY681/pIL-2,為豬IL-2生物學功能的進一步研究和開髮奠定基礎.
채용RT-PCR기술자예남흑저비림파세포중확증저IL-2기인(pIL-2),RT-PCR산물진행T-A극륭병측서,획득료저IL-2기인서렬.장BamH Ⅰ매절적저IL-2기인비정향극륭도BamH Ⅰ매절병거린산화적pSY538재체상,통과PCR、매절화측서감정,사선정향삽입적중조질립pSY538/pIL-2.NotⅠ매절pSY538/pIL-2후,득도함유쌍계동자LP2화EP2적저IL-2기인편단,장기아극륭도함유LacZ기인적pSY681재체상,사선정향삽입적중조금두병독전이질립pSY681/pIL-2.측서결과표명,극륭적예남흑저IL-2기인장482 bp,포함1개완정독마광(465 bp),여GenBank 중기타5조저IL-2기인핵감산동원성위99.9％.중조질립pSY681/pIL-2경매절、측서감정,증실함유목적편단,차련접、구건정학.성공구건료중조금두병독전이질립pSY681/pIL-2,위저IL-2생물학공능적진일보연구화개발전정기출.
