南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
8期
1090-1093
,共4页
杨辉%吕彦茹%余磊%赵芳%王发合%李杰民%梁海秋%朱萍%周河治
楊輝%呂彥茹%餘磊%趙芳%王髮閤%李傑民%樑海鞦%硃萍%週河治
양휘%려언여%여뢰%조방%왕발합%리걸민%량해추%주평%주하치
类芽孢杆菌%胆固醇氧化酶%分离%纯化
類芽孢桿菌%膽固醇氧化酶%分離%純化
류아포간균%담고순양화매%분리%순화
[目的]探讨类芽孢杆菌产生胞外胆固醇氧化酶(COD)的分离、纯化方法,为其生产和应用提供技术支持.[方法]将类芽孢杆菌发酵液通过旋转蒸发浓缩、蔗糖透析浓缩、DEAE离子交换柱层析和凝胶层析,纯化目的蛋白,然后测定获得酶的基本酶学性质.[结果]类芽孢杆菌发酵液经DEAE离子交换柱层析和SephadexG-75凝胶柱层析后,纯化所得的COD比活力达6.83U/mg,酶活力回收为35.6％,纯化倍数为13.4倍.纯化酶经SDS-PAGE显示为均一条带,分子量约58 kDa.将纯化的COD作用于不同浓度胆固醇,采用Lineweaver Burk作图法,测得其Km=3.3×10-5 mol/L.薄层层析结果显示,产物为胆甾-4-烯-3-酮,说明纯化所得酶是COD.[结论]纯化获得电泳纯类的芽孢杆菌胞外COD,其与底物亲和力较强,具有潜在的应用研究价值.
[目的]探討類芽孢桿菌產生胞外膽固醇氧化酶(COD)的分離、純化方法,為其生產和應用提供技術支持.[方法]將類芽孢桿菌髮酵液通過鏇轉蒸髮濃縮、蔗糖透析濃縮、DEAE離子交換柱層析和凝膠層析,純化目的蛋白,然後測定穫得酶的基本酶學性質.[結果]類芽孢桿菌髮酵液經DEAE離子交換柱層析和SephadexG-75凝膠柱層析後,純化所得的COD比活力達6.83U/mg,酶活力迴收為35.6％,純化倍數為13.4倍.純化酶經SDS-PAGE顯示為均一條帶,分子量約58 kDa.將純化的COD作用于不同濃度膽固醇,採用Lineweaver Burk作圖法,測得其Km=3.3×10-5 mol/L.薄層層析結果顯示,產物為膽甾-4-烯-3-酮,說明純化所得酶是COD.[結論]純化穫得電泳純類的芽孢桿菌胞外COD,其與底物親和力較彊,具有潛在的應用研究價值.
[목적]탐토류아포간균산생포외담고순양화매(COD)적분리、순화방법,위기생산화응용제공기술지지.[방법]장류아포간균발효액통과선전증발농축、자당투석농축、DEAE리자교환주층석화응효층석,순화목적단백,연후측정획득매적기본매학성질.[결과]류아포간균발효액경DEAE리자교환주층석화SephadexG-75응효주층석후,순화소득적COD비활력체6.83U/mg,매활력회수위35.6％,순화배수위13.4배.순화매경SDS-PAGE현시위균일조대,분자량약58 kDa.장순화적COD작용우불동농도담고순,채용Lineweaver Burk작도법,측득기Km=3.3×10-5 mol/L.박층층석결과현시,산물위담치-4-희-3-동,설명순화소득매시COD.[결론]순화획득전영순류적아포간균포외COD,기여저물친화력교강,구유잠재적응용연구개치.
