CAJ | 학술논문

[目的]建立PCR结合长臂光敏生物素核酸探针杂交检测医学真菌的方法.[方法]首先合成医学真菌通用引物,用PCR扩增白色念珠菌18S rRNA基因,用长臂光敏生物素标记纯化的扩增产物作为核酸探针,然后用此探针对PCR后的基因扩增产物进行Southem杂交检测医学真菌.通过用白色念珠菌感染人鼠,建立念珠菌病的实验动物模型,验证血培养法、PCR法和PCR扩增及Southern杂交检测医学重要真菌的敏感性.[结果]通用引物可以扩增白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种医学常见真菌的18S rRNA基因,扩增片段长度为621～687bp.此引物只扩增真菌DNA,不扩增临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA.利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增及长臂光敏生物素核酸探针Southem杂交法检测真菌血症的灵敏度,实验证明后者的敏感性最高.[结论]本方法快速、敏感、不需放射性同位素,有较好的临床应用前景.
[목적]건립PCR결합장비광민생물소핵산탐침잡교검측의학진균적방법.[방법]수선합성의학진균통용인물,용PCR확증백색념주균18S rRNA기인,용장비광민생물소표기순화적확증산물작위핵산탐침,연후용차탐침대PCR후적기인확증산물진행Southem잡교검측의학진균.통과용백색념주균감염인서,건립념주균병적실험동물모형,험증혈배양법、PCR법화PCR확증급Southern잡교검측의학중요진균적민감성.[결과]통용인물가이확증백색념주균、열대념주균、신형은구균、황곡매균、연곡매균등9충의학상견진균적18S rRNA기인,확증편단장도위621～687bp.차인물지확증진균DNA,불확증림상상견적세균、병독화포유동물조직세포DNA.이용실험동물모형비교료혈배양법、PCR법화PCR확증급장비광민생물소핵산탐침Southem잡교법검측진균혈증적령민도,실험증명후자적민감성최고.[결론]본방법쾌속、민감、불수방사성동위소,유교호적림상응용전경.