湖南医科大学学报
湖南醫科大學學報
호남의과대학학보
BULLETIN OF HUNAN MEDICAL UNIVERSITY
2003年
4期
322-326
,共5页
张晓杰%鲁纯平%唐建华%顾善兰%禹虹
張曉傑%魯純平%唐建華%顧善蘭%禹虹
장효걸%로순평%당건화%고선란%우홍
竞争性RT-PCR%糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D%逆转录%白血病
競爭性RT-PCR%糖基化燐脂酰肌醇特異性燐脂酶D%逆轉錄%白血病
경쟁성RT-PCR%당기화린지선기순특이성린지매D%역전록%백혈병
目的:建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)基因表达水平的竞争性RT-PCR方法,以研究GPI-PLD与白血病等疾病的关系.方法:首先用PCR 定点诱变法构建GPI-PLD的竞争性cDNA模板,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区,但在长度上要比靶cDNA少20个碱基.把该竞争性cDNA模板在体外转录出的竞争性RNA作为RT-PCR的内标准,与白血病细胞株K562细胞的总RNA在同一体系内进行逆转录和PCR扩增,二者的PCR产物因长度不同可经电泳区分开,然后对电泳图像进行光密度扫描,根据已知的竞争性RNA模板的量计算出GPI-PLD mRNA的量,从而得到GPI-PLD基因的绝对表达量.结果:构建和制备了长度为198 bp的GPI-PLD 竞争性RNA模板,该模板与靶模板呈明显的竞争性RT-PCR反应;测得K562细胞GPI-PLD基因的表达水平为每纳克(440±20)拷贝.结论:成功地建立了一种定量检测GPI-PLD基因表达水平的竞争性RT-PCR方法,该方法具有灵敏、准确等优点.
目的:建立一種定量檢測糖基化燐脂酰肌醇特異性燐脂酶D(GPI-PLD)基因錶達水平的競爭性RT-PCR方法,以研究GPI-PLD與白血病等疾病的關繫.方法:首先用PCR 定點誘變法構建GPI-PLD的競爭性cDNA模闆,該模闆與靶cDNA具有相同的引物結閤區,但在長度上要比靶cDNA少20箇堿基.把該競爭性cDNA模闆在體外轉錄齣的競爭性RNA作為RT-PCR的內標準,與白血病細胞株K562細胞的總RNA在同一體繫內進行逆轉錄和PCR擴增,二者的PCR產物因長度不同可經電泳區分開,然後對電泳圖像進行光密度掃描,根據已知的競爭性RNA模闆的量計算齣GPI-PLD mRNA的量,從而得到GPI-PLD基因的絕對錶達量.結果:構建和製備瞭長度為198 bp的GPI-PLD 競爭性RNA模闆,該模闆與靶模闆呈明顯的競爭性RT-PCR反應;測得K562細胞GPI-PLD基因的錶達水平為每納剋(440±20)拷貝.結論:成功地建立瞭一種定量檢測GPI-PLD基因錶達水平的競爭性RT-PCR方法,該方法具有靈敏、準確等優點.
목적:건립일충정량검측당기화린지선기순특이성린지매D(GPI-PLD)기인표체수평적경쟁성RT-PCR방법,이연구GPI-PLD여백혈병등질병적관계.방법:수선용PCR 정점유변법구건GPI-PLD적경쟁성cDNA모판,해모판여파cDNA구유상동적인물결합구,단재장도상요비파cDNA소20개감기.파해경쟁성cDNA모판재체외전록출적경쟁성RNA작위RT-PCR적내표준,여백혈병세포주K562세포적총RNA재동일체계내진행역전록화PCR확증,이자적PCR산물인장도불동가경전영구분개,연후대전영도상진행광밀도소묘,근거이지적경쟁성RNA모판적량계산출GPI-PLD mRNA적량,종이득도GPI-PLD기인적절대표체량.결과:구건화제비료장도위198 bp적GPI-PLD 경쟁성RNA모판,해모판여파모판정명현적경쟁성RT-PCR반응;측득K562세포GPI-PLD기인적표체수평위매납극(440±20)고패.결론:성공지건립료일충정량검측GPI-PLD기인표체수평적경쟁성RT-PCR방법,해방법구유령민、준학등우점.
