寄生虫与医学昆虫学报
寄生蟲與醫學昆蟲學報
기생충여의학곤충학보
ACTA PARASITOLOGICA ET MEDICA ENTOMOLOGICA SINICA
2004年
2期
96-100
,共5页
高波%刘志刚%苏东明%罗时文
高波%劉誌剛%囌東明%囉時文
고파%류지강%소동명%라시문
蟑螂%CrPI%包涵体%变复性%质谱
蟑螂%CrPI%包涵體%變複性%質譜
장랑%CrPI%포함체%변복성%질보
本研究优化了GST-Cr PI融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达条件和GST-Cr PI包涵体的复性条件;采用Glutathione SepharoseTM 4B亲和层析分离纯化融合蛋白,以Xa酶切去掉其GST标签后,对Cr PI进行了电喷雾电离串联质谱分析(ESI-MS/MS).结果表明,IPTG浓度对该蛋白的诱导效果影响不大,OD600值为0.6时诱导效果最佳;复性蛋白浓度和L-精氨酸浓度对稀释复性结果有重要影响.纯化融合蛋白经Xa酶切、分子筛层析去掉GST标签后,重组蛋白的纯度达95%,经质谱进一步鉴定为蟑螂Cr PJ变应原.
本研究優化瞭GST-Cr PI融閤蛋白在大腸桿菌中的誘導錶達條件和GST-Cr PI包涵體的複性條件;採用Glutathione SepharoseTM 4B親和層析分離純化融閤蛋白,以Xa酶切去掉其GST標籤後,對Cr PI進行瞭電噴霧電離串聯質譜分析(ESI-MS/MS).結果錶明,IPTG濃度對該蛋白的誘導效果影響不大,OD600值為0.6時誘導效果最佳;複性蛋白濃度和L-精氨痠濃度對稀釋複性結果有重要影響.純化融閤蛋白經Xa酶切、分子篩層析去掉GST標籤後,重組蛋白的純度達95%,經質譜進一步鑒定為蟑螂Cr PJ變應原.
본연구우화료GST-Cr PI융합단백재대장간균중적유도표체조건화GST-Cr PI포함체적복성조건;채용Glutathione SepharoseTM 4B친화층석분리순화융합단백,이Xa매절거도기GST표첨후,대Cr PI진행료전분무전리천련질보분석(ESI-MS/MS).결과표명,IPTG농도대해단백적유도효과영향불대,OD600치위0.6시유도효과최가;복성단백농도화L-정안산농도대희석복성결과유중요영향.순화융합단백경Xa매절、분자사층석거도GST표첨후,중조단백적순도체95%,경질보진일보감정위장랑Cr PJ변응원.
