眼科新进展
眼科新進展
안과신진전
RECENT ADVANCES IN OPHTHALMOLOGY
2004年
5期
358-360
,共3页
柯碧莲%张皙%许迅%邱孝芝%沈卫英%申庆祥
柯碧蓮%張皙%許迅%邱孝芝%瀋衛英%申慶祥
가벽련%장석%허신%구효지%침위영%신경상
羊膜%反转录PCR%碱性成纤维细胞生长因子
羊膜%反轉錄PCR%堿性成纖維細胞生長因子
양막%반전록PCR%감성성섬유세포생장인자
目的研究新鲜和冷冻保存羊膜中是否存在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA.方法从新鲜和保存1周羊膜中用常规的酚、氯仿法抽提总RNA,RT-PCR一步法扩增.PCR产物回收后与PBS质粒同时以EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切,将酶切产物通过T4DNA连接酶连接,重组质粒.将重组质粒导入感受态的DH5α大肠杆菌中,筛选阳性菌落抽提质粒后行酶切鉴定,选取阳性克隆测序.结果RT-PCR产物电泳,可见单一清晰的条带,约410bp.重组质粒酶切后见二条带,小带约410bp,与插入片段一致.测序结果表明目的片段与bFGF的序列完全相同.结论新鲜和冷冻保存的羊膜组织中存在bFGF的mRNA.
目的研究新鮮和冷凍保存羊膜中是否存在堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)mRNA.方法從新鮮和保存1週羊膜中用常規的酚、氯倣法抽提總RNA,RT-PCR一步法擴增.PCR產物迴收後與PBS質粒同時以EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ雙酶切,將酶切產物通過T4DNA連接酶連接,重組質粒.將重組質粒導入感受態的DH5α大腸桿菌中,篩選暘性菌落抽提質粒後行酶切鑒定,選取暘性剋隆測序.結果RT-PCR產物電泳,可見單一清晰的條帶,約410bp.重組質粒酶切後見二條帶,小帶約410bp,與插入片段一緻.測序結果錶明目的片段與bFGF的序列完全相同.結論新鮮和冷凍保存的羊膜組織中存在bFGF的mRNA.
목적연구신선화냉동보존양막중시부존재감성성섬유세포생장인자(bFGF)mRNA.방법종신선화보존1주양막중용상규적분、록방법추제총RNA,RT-PCR일보법확증.PCR산물회수후여PBS질립동시이EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ쌍매절,장매절산물통과T4DNA련접매련접,중조질립.장중조질립도입감수태적DH5α대장간균중,사선양성균락추제질립후행매절감정,선취양성극륭측서.결과RT-PCR산물전영,가견단일청석적조대,약410bp.중조질립매절후견이조대,소대약410bp,여삽입편단일치.측서결과표명목적편단여bFGF적서렬완전상동.결론신선화냉동보존적양막조직중존재bFGF적mRNA.
