CAJ | 학술논문

利用PCR技术人工合成编码酿酒酵母泛素样特异性蛋白酶1(Ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)第403到621个氨基酸残基之间的DNA片段Ulp1p,并连接到大肠杆菌表达载体pET-3c中,构建出重组表达质粒pET-Ulp1p.将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选转化子.经IPTG诱导4h后,SDS-PAGE结果显示,Ulp1p为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的50.8%.通过Ni-NTA凝胶亲和层析和G-25凝胶层析联用可以获得纯度大于95%的Ulp1p.Western blotting分析表明,Ulp1p能与6xHis抗体产生免疫反应.以重组蛋白SUMO-hEGF(人表皮生长因子)和GST-SUMO-MT(金属硫蛋白)为底物进行酶切分析,结果显示,Ulp1p能特异性水解这两种SUMO融合蛋白,其比活为1.386×104U/mg.
이용PCR기술인공합성편마양주효모범소양특이성단백매1(Ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)제403도621개안기산잔기지간적DNA편단Ulp1p,병련접도대장간균표체재체pET-3c중,구건출중조표체질립pET-Ulp1p.장중조질립전화지대장간균BL21(DE3)중,안변청매소항성사선전화자.경IPTG유도4h후,SDS-PAGE결과현시,Ulp1p위가용성표체,표체량점균체총단백적50.8%.통과Ni-NTA응효친화층석화G-25응효층석련용가이획득순도대우95%적Ulp1p.Western blotting분석표명,Ulp1p능여6xHis항체산생면역반응.이중조단백SUMO-hEGF(인표피생장인자)화GST-SUMO-MT(금속류단백)위저물진행매절분석,결과현시,Ulp1p능특이성수해저량충SUMO융합단백,기비활위1.386×104U/mg.