CAJ | 학술논문

以牛蛙皮肤组织为材料获得总RNA,用偶联Oligo(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含Sfi Ⅰ酶切位点的CDSⅢ引物在逆转录酶的作用下合成cDNA的第1链,以含Sfi Ⅰ酶切位点的CDSⅢ引物和SMART引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经Sfi Ⅰ酶切,通过T4DNA连接酶连接到经过相同酶切的λTripIEx2载体,体外包装后转染E.coli XLI-Blue 宿主菌,进行滴度测试和文库扩增.结果构建的牛蛙皮肤cDNA 文库原始库容量为1.42×106 PFU/mL,插入片段长度在0.5～1.5 kb,重组率为89.5%,扩增后的文库滴度为1.35×109 PFU/mL,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析.
이우와피부조직위재료획득총RNA,용우련Oligo(dT)적자주순화mRNA후,이용함Sfi Ⅰ매절위점적CDSⅢ인물재역전록매적작용하합성cDNA적제1련,이함Sfi Ⅰ매절위점적CDSⅢ인물화SMART인물,이용LD-PCR합성쌍련cDNA,쌍련cDNA경Sfi Ⅰ매절,통과T4DNA련접매련접도경과상동매절적λTripIEx2재체,체외포장후전염E.coli XLI-Blue 숙주균,진행적도측시화문고확증.결과구건적우와피부cDNA 문고원시고용량위1.42×106 PFU/mL,삽입편단장도재0.5～1.5 kb,중조솔위89.5%,확증후적문고적도위1.35×109 PFU/mL,구건적문고질량부합요구,가용우대규모적공능기인분석.