北京医学
北京醫學
북경의학
BEIJING MEDICAL JOURNAL
2009年
3期
150-154
,共5页
赵班%李慧凛%连耀国%吴华%郑法雷
趙班%李慧凜%連耀國%吳華%鄭法雷
조반%리혜름%련요국%오화%정법뢰
肾小管上皮-间充质细胞转化%转化生长因子-β1%α-平滑肌肌动蛋白%单核细胞趋化因子-1%整合素连接激酶
腎小管上皮-間充質細胞轉化%轉化生長因子-β1%α-平滑肌肌動蛋白%單覈細胞趨化因子-1%整閤素連接激酶
신소관상피-간충질세포전화%전화생장인자-β1%α-평활기기동단백%단핵세포추화인자-1%정합소련접격매
目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶(ILK)表达变化的关系.方法 体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/ml TGF-β1处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1(0.1、1.0、10、100 ng/ml)处理细胞,或以同一浓度的MCP-1(1 ng/ml)在不同时间点(0h、12h、24h、36h、48h、72h)处理细胞.用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α-SMA mRNA的表达,Western blot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达.在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂(PD98059,10μmol/L),p38 MAPK抑制剂(SB203580,5μmol/L)和ROCK抑制剂(Y27632,500μmol/L)对HKC细胞ILK表达的影响.结果 MCP-1(0.1、1.0ng/ml)作用后HKC细胞α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组(P<0.01),但低于阳性对照组(P<0.01);其中以1.0ng/ml MCP-1组作用后α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著(P<0.001).1.0ng/ml MCP-1作用后细胞α-SMA mR-NA和α-SMA、ILK蛋白表达在0～48h内逐渐增加,48h达最高峰(P<0.01),72h时呈下降趋势.分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异(P>0.05).结论 MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并呈时间浓度依赖性,该作用可能与MCP-1上调ILK的表达有关;本研究未发现MCP-1上调ILK的信号传导途径与MEK1、p38 MAPK、ROCK途径有关.
目的 探討單覈細胞趨化蛋白-1(MCP-1)誘導體外培養的腎小管上皮細胞轉分化的作用及其與細胞整閤素連接激酶(ILK)錶達變化的關繫.方法 體外培養的HKC,以未處理的HKC為陰性對照,以8ng/ml TGF-β1處理的HKC為暘性對照,以不同濃度的MCP-1(0.1、1.0、10、100 ng/ml)處理細胞,或以同一濃度的MCP-1(1 ng/ml)在不同時間點(0h、12h、24h、36h、48h、72h)處理細胞.用半定量RT-PCR方法測定各組HKC細胞α-SMA mRNA的錶達,Western blot方法測定各組HKC細胞α-SMA及ILK錶達.在上述實驗基礎上進一步觀察MEK抑製劑(PD98059,10μmol/L),p38 MAPK抑製劑(SB203580,5μmol/L)和ROCK抑製劑(Y27632,500μmol/L)對HKC細胞ILK錶達的影響.結果 MCP-1(0.1、1.0ng/ml)作用後HKC細胞α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白錶達顯著高于陰性對照組(P<0.01),但低于暘性對照組(P<0.01);其中以1.0ng/ml MCP-1組作用後α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白錶達水平增高更為顯著(P<0.001).1.0ng/ml MCP-1作用後細胞α-SMA mR-NA和α-SMA、ILK蛋白錶達在0～48h內逐漸增加,48h達最高峰(P<0.01),72h時呈下降趨勢.分彆加入阻斷劑PD98059、SB203580和Y27632後,HKC細胞ILK蛋白錶達水平與MCP-1單獨作用無顯著性差異(P>0.05).結論 MCP-1可誘導腎小管上皮細胞轉分化併呈時間濃度依賴性,該作用可能與MCP-1上調ILK的錶達有關;本研究未髮現MCP-1上調ILK的信號傳導途徑與MEK1、p38 MAPK、ROCK途徑有關.
목적 탐토단핵세포추화단백-1(MCP-1)유도체외배양적신소관상피세포전분화적작용급기여세포정합소련접격매(ILK)표체변화적관계.방법 체외배양적HKC,이미처리적HKC위음성대조,이8ng/ml TGF-β1처리적HKC위양성대조,이불동농도적MCP-1(0.1、1.0、10、100 ng/ml)처리세포,혹이동일농도적MCP-1(1 ng/ml)재불동시간점(0h、12h、24h、36h、48h、72h)처리세포.용반정량RT-PCR방법측정각조HKC세포α-SMA mRNA적표체,Western blot방법측정각조HKC세포α-SMA급ILK표체.재상술실험기출상진일보관찰MEK억제제(PD98059,10μmol/L),p38 MAPK억제제(SB203580,5μmol/L)화ROCK억제제(Y27632,500μmol/L)대HKC세포ILK표체적영향.결과 MCP-1(0.1、1.0ng/ml)작용후HKC세포α-SMA mRNA화α-SMA、ILK단백표체현저고우음성대조조(P<0.01),단저우양성대조조(P<0.01);기중이1.0ng/ml MCP-1조작용후α-SMA mRNA화α-SMA、ILK단백표체수평증고경위현저(P<0.001).1.0ng/ml MCP-1작용후세포α-SMA mR-NA화α-SMA、ILK단백표체재0～48h내축점증가,48h체최고봉(P<0.01),72h시정하강추세.분별가입조단제PD98059、SB203580화Y27632후,HKC세포ILK단백표체수평여MCP-1단독작용무현저성차이(P>0.05).결론 MCP-1가유도신소관상피세포전분화병정시간농도의뢰성,해작용가능여MCP-1상조ILK적표체유관;본연구미발현MCP-1상조ILK적신호전도도경여MEK1、p38 MAPK、ROCK도경유관.
