热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2010年
8期
1239-1243
,共5页
香蕉束顶病毒%Rb蛋白%原核表达%抗血清%间接ELISA
香蕉束頂病毒%Rb蛋白%原覈錶達%抗血清%間接ELISA
향초속정병독%Rb단백%원핵표체%항혈청%간접ELISA
应用PCR方法从感染香蕉束顶病毒的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中克隆了R6(Rb-binding-likeprotein)基因的编码区,将其插入原核表达载体pET-28b中构建重组质粒pET28b-Rb.转化重组质粒的E.coliBL21(DE3)进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析结果表明,表达产物大小为22.6 ku,且主要以包涵体形式稳定表达.目的蛋白经Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化后免疫家兔并获得抗血清.Western blot检测结果表明,抗血清与诱导表达的BBTV编码Rb蛋白发生特异性反应.间接ELISA法测定的抗血清效价大于1:250 000.用抗血清对感病香蕉和健康香蕉进行检测,结果表明,抗血清对感病香蕉有很高特异性,最佳工作浓度为1:1 500.
應用PCR方法從感染香蕉束頂病毒的香蕉植株幼嫩假莖和葉片總DNA中剋隆瞭R6(Rb-binding-likeprotein)基因的編碼區,將其插入原覈錶達載體pET-28b中構建重組質粒pET28b-Rb.轉化重組質粒的E.coliBL21(DE3)進行IPTG誘導錶達,SDS-PAGE分析結果錶明,錶達產物大小為22.6 ku,且主要以包涵體形式穩定錶達.目的蛋白經Ni2+-NTA瓊脂糖親和層析純化後免疫傢兔併穫得抗血清.Western blot檢測結果錶明,抗血清與誘導錶達的BBTV編碼Rb蛋白髮生特異性反應.間接ELISA法測定的抗血清效價大于1:250 000.用抗血清對感病香蕉和健康香蕉進行檢測,結果錶明,抗血清對感病香蕉有很高特異性,最佳工作濃度為1:1 500.
응용PCR방법종감염향초속정병독적향초식주유눈가경화협편총DNA중극륭료R6(Rb-binding-likeprotein)기인적편마구,장기삽입원핵표체재체pET-28b중구건중조질립pET28b-Rb.전화중조질립적E.coliBL21(DE3)진행IPTG유도표체,SDS-PAGE분석결과표명,표체산물대소위22.6 ku,차주요이포함체형식은정표체.목적단백경Ni2+-NTA경지당친화층석순화후면역가토병획득항혈청.Western blot검측결과표명,항혈청여유도표체적BBTV편마Rb단백발생특이성반응.간접ELISA법측정적항혈청효개대우1:250 000.용항혈청대감병향초화건강향초진행검측,결과표명,항혈청대감병향초유흔고특이성,최가공작농도위1:1 500.
