浙江理工大学学报
浙江理工大學學報
절강리공대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY
2011年
2期
251-255
,共5页
项军强%蒋红亮%张虹%丁明%赵辅昆
項軍彊%蔣紅亮%張虹%丁明%趙輔昆
항군강%장홍량%장홍%정명%조보곤
糖尿病并发症%醛糖还原酶%表达纯化
糖尿病併髮癥%醛糖還原酶%錶達純化
당뇨병병발증%철당환원매%표체순화
醛糖还原酶能促使葡萄糖转化成山梨醇,是多元醇代谢通路的限速酶,与糖尿病并发症的发生和发展有密切关系.用RT-PCR扩增醛糖还原酶基因,将扩增产物克隆到大肠杆菌表达载体pET22b(+),构建重组表达载体pET22b(+)-AR.经PCR、双酶切和序列测定鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定后,利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得重组蛋白AR-(His)6.紫外分光光度法对AR-(His)6进行酶活检测,其比活力为0.45 U/mg,为下一步筛选具有抑制醛糖还原酶活性的化合物及开发有临床应用价值的醛糖还原酶抑制剂提供参考.
醛糖還原酶能促使葡萄糖轉化成山梨醇,是多元醇代謝通路的限速酶,與糖尿病併髮癥的髮生和髮展有密切關繫.用RT-PCR擴增醛糖還原酶基因,將擴增產物剋隆到大腸桿菌錶達載體pET22b(+),構建重組錶達載體pET22b(+)-AR.經PCR、雙酶切和序列測定鑒定後,轉化E.coli BL21(DE3),經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE和Western blotting對重組蛋白進行分析和鑒定後,利用Ni-NTA瓊脂糖親和層析純化穫得重組蛋白AR-(His)6.紫外分光光度法對AR-(His)6進行酶活檢測,其比活力為0.45 U/mg,為下一步篩選具有抑製醛糖還原酶活性的化閤物及開髮有臨床應用價值的醛糖還原酶抑製劑提供參攷.
철당환원매능촉사포도당전화성산리순,시다원순대사통로적한속매,여당뇨병병발증적발생화발전유밀절관계.용RT-PCR확증철당환원매기인,장확증산물극륭도대장간균표체재체pET22b(+),구건중조표체재체pET22b(+)-AR.경PCR、쌍매절화서렬측정감정후,전화E.coli BL21(DE3),경IPTG유도표체,SDS-PAGE화Western blotting대중조단백진행분석화감정후,이용Ni-NTA경지당친화층석순화획득중조단백AR-(His)6.자외분광광도법대AR-(His)6진행매활검측,기비활력위0.45 U/mg,위하일보사선구유억제철당환원매활성적화합물급개발유림상응용개치적철당환원매억제제제공삼고.
