中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2011年
16期
3096-3099
,共4页
苏伟%高枫%龚少愚%魏慧渊%孙茂民%江家责
囌偉%高楓%龔少愚%魏慧淵%孫茂民%江傢責
소위%고풍%공소우%위혜연%손무민%강가책
人硫氧还蛋白%基因克隆%RT-PCR%真核表达载体%COS-7
人硫氧還蛋白%基因剋隆%RT-PCR%真覈錶達載體%COS-7
인류양환단백%기인극륭%RT-PCR%진핵표체재체%COS-7
目的 克隆人硫氧还蛋白(hTRX)cDNA序列,进行真核表达载体的构建.方法 应用RT-PCR技术,以胎肝组织细胞总RNA为模板,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA基因,并克隆至pUCm-T载体中,经PCR和测序鉴定正确后,再构建重组真核表达载体pcDNA3.0-hTRX,采用PCR、双酶切和基因测序鉴定;利用阳性脂质体Lipofectamine将其转入COS-7细胞(瞬时表达细胞),RT-PCR检测其表达情况.结果 将所得序列与GenBank(J04026)提供的序列比较,其酶活性中心(Trp-Cys-Gly-Pro-Cya)和基序与已知序列一致;PCR、酶切及测序鉴定表明真核表达载体构建正确;COS-7细胞中有hTRX的表达.结论 成功克隆编码hTRX成熟蛋白的cDNA基因,构建其真核表达载体pcDNA3.0-hTRX,并在COS-7细胞中得到了表达,为进一步探讨hTRX的生物活性和应用奠定了基础.
目的 剋隆人硫氧還蛋白(hTRX)cDNA序列,進行真覈錶達載體的構建.方法 應用RT-PCR技術,以胎肝組織細胞總RNA為模闆,擴增齣hTRX成熟蛋白的cDNA基因,併剋隆至pUCm-T載體中,經PCR和測序鑒定正確後,再構建重組真覈錶達載體pcDNA3.0-hTRX,採用PCR、雙酶切和基因測序鑒定;利用暘性脂質體Lipofectamine將其轉入COS-7細胞(瞬時錶達細胞),RT-PCR檢測其錶達情況.結果 將所得序列與GenBank(J04026)提供的序列比較,其酶活性中心(Trp-Cys-Gly-Pro-Cya)和基序與已知序列一緻;PCR、酶切及測序鑒定錶明真覈錶達載體構建正確;COS-7細胞中有hTRX的錶達.結論 成功剋隆編碼hTRX成熟蛋白的cDNA基因,構建其真覈錶達載體pcDNA3.0-hTRX,併在COS-7細胞中得到瞭錶達,為進一步探討hTRX的生物活性和應用奠定瞭基礎.
목적 극륭인류양환단백(hTRX)cDNA서렬,진행진핵표체재체적구건.방법 응용RT-PCR기술,이태간조직세포총RNA위모판,확증출hTRX성숙단백적cDNA기인,병극륭지pUCm-T재체중,경PCR화측서감정정학후,재구건중조진핵표체재체pcDNA3.0-hTRX,채용PCR、쌍매절화기인측서감정;이용양성지질체Lipofectamine장기전입COS-7세포(순시표체세포),RT-PCR검측기표체정황.결과 장소득서렬여GenBank(J04026)제공적서렬비교,기매활성중심(Trp-Cys-Gly-Pro-Cya)화기서여이지서렬일치;PCR、매절급측서감정표명진핵표체재체구건정학;COS-7세포중유hTRX적표체.결론 성공극륭편마hTRX성숙단백적cDNA기인,구건기진핵표체재체pcDNA3.0-hTRX,병재COS-7세포중득도료표체,위진일보탐토hTRX적생물활성화응용전정료기출.
