生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
4期
93-97
,共5页
张瑞丽%许玉兰%王大玮%吕学辉%何承忠%段安安
張瑞麗%許玉蘭%王大瑋%呂學輝%何承忠%段安安
장서려%허옥란%왕대위%려학휘%하승충%단안안
云南松%SSR%优化%正交设计
雲南鬆%SSR%優化%正交設計
운남송%SSR%우화%정교설계
为了建立适宜云南松SSR-PCR的反应体系和扩增程序,利用近缘种火炬松的引物,采用正交设计L16(45)对云南松SSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了适于云南松的SSR反应体系.在10μL的反应体系中,模板DNA的用量为30.0 ng,Taq DNA聚合酶的用量为1.0 U,Mg2+的浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物的浓度为0.2 μmol/L.扩增程序为:94℃预变性4 min；94℃变性45 s,48℃退火30 s,72℃延伸30 s,30个循环；72℃延长10 min,4℃保存.最后利用1个居群对该体系进行稳定性验证,结果可用于云南松SSR标记的研究.
為瞭建立適宜雲南鬆SSR-PCR的反應體繫和擴增程序,利用近緣種火炬鬆的引物,採用正交設計L16(45)對雲南鬆SSR-PCR反應體繫的5因素(Taq酶、Mg2+、模闆DNA、dNTP、引物)在4箇水平上進行優化,篩選齣各反應因素的最佳水平,建立瞭適于雲南鬆的SSR反應體繫.在10μL的反應體繫中,模闆DNA的用量為30.0 ng,Taq DNA聚閤酶的用量為1.0 U,Mg2+的濃度為2.0 mmol/L,dNTPs濃度為0.4 mmol/L,引物的濃度為0.2 μmol/L.擴增程序為:94℃預變性4 min；94℃變性45 s,48℃退火30 s,72℃延伸30 s,30箇循環；72℃延長10 min,4℃保存.最後利用1箇居群對該體繫進行穩定性驗證,結果可用于雲南鬆SSR標記的研究.
위료건립괄의운남송SSR-PCR적반응체계화확증정서,이용근연충화거송적인물,채용정교설계L16(45)대운남송SSR-PCR반응체계적5인소(Taq매、Mg2+、모판DNA、dNTP、인물)재4개수평상진행우화,사선출각반응인소적최가수평,건립료괄우운남송적SSR반응체계.재10μL적반응체계중,모판DNA적용량위30.0 ng,Taq DNA취합매적용량위1.0 U,Mg2+적농도위2.0 mmol/L,dNTPs농도위0.4 mmol/L,인물적농도위0.2 μmol/L.확증정서위:94℃예변성4 min；94℃변성45 s,48℃퇴화30 s,72℃연신30 s,30개순배；72℃연장10 min,4℃보존.최후이용1개거군대해체계진행은정성험증,결과가용우운남송SSR표기적연구.
