畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
6期
950-955
,共6页
赵菲菲%赵钦%胡守彬%陈福勇%肖一红%周恩民
趙菲菲%趙欽%鬍守彬%陳福勇%肖一紅%週恩民
조비비%조흠%호수빈%진복용%초일홍%주은민
猪戊型肝炎病毒%衣壳蛋白%单克隆抗体%鉴定
豬戊型肝炎病毒%衣殼蛋白%單剋隆抗體%鑒定
저무형간염병독%의각단백%단극륭항체%감정
为获得猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)Ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体,将猪HEV衣壳蛋白的C端267(408-675)个氨基酸基因序列克隆人原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒pET-28a-ORF2-C,转化E.coli Rosetta (BL21)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定,纯化后免疫小鼠.取免疫小鼠的脾脏与鼠骨髓瘤细胞SP2/O融合制备单克隆抗体.通过间接ELISA和竞争ELISA方法筛选并鉴定单抗.结果表明蛋白得到正确、高效表达,获得3株识别不同的抗原表位区的单克隆抗体,分别命名为Mab-1E4 (IgG1)、Mab-2C7 (IgG1)和Mab-2G9 (IgG2b),其中1E4和2G9能阻断临床阳性猪血清,提示该2株单克隆抗体识别的抗原表位是猪HEV Ⅳ型衣壳蛋白上重要的抗原表位区,而单抗Mab-2C7不能阻断.本研究为猪HEV Ⅳ型的诊断及研究提供重要工具.
為穫得豬戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)Ⅳ型衣殼蛋白單剋隆抗體,將豬HEV衣殼蛋白的C耑267(408-675)箇氨基痠基因序列剋隆人原覈錶達載體pET-28a(+),構建重組質粒pET-28a-ORF2-C,轉化E.coli Rosetta (BL21)感受態細胞進行誘導錶達,SDS-PAGE和Western blot鑒定,純化後免疫小鼠.取免疫小鼠的脾髒與鼠骨髓瘤細胞SP2/O融閤製備單剋隆抗體.通過間接ELISA和競爭ELISA方法篩選併鑒定單抗.結果錶明蛋白得到正確、高效錶達,穫得3株識彆不同的抗原錶位區的單剋隆抗體,分彆命名為Mab-1E4 (IgG1)、Mab-2C7 (IgG1)和Mab-2G9 (IgG2b),其中1E4和2G9能阻斷臨床暘性豬血清,提示該2株單剋隆抗體識彆的抗原錶位是豬HEV Ⅳ型衣殼蛋白上重要的抗原錶位區,而單抗Mab-2C7不能阻斷.本研究為豬HEV Ⅳ型的診斷及研究提供重要工具.
위획득저무형간염병독(Hepatitis E virus,HEV)Ⅳ형의각단백단극륭항체,장저HEV의각단백적C단267(408-675)개안기산기인서렬극륭인원핵표체재체pET-28a(+),구건중조질립pET-28a-ORF2-C,전화E.coli Rosetta (BL21)감수태세포진행유도표체,SDS-PAGE화Western blot감정,순화후면역소서.취면역소서적비장여서골수류세포SP2/O융합제비단극륭항체.통과간접ELISA화경쟁ELISA방법사선병감정단항.결과표명단백득도정학、고효표체,획득3주식별불동적항원표위구적단극륭항체,분별명명위Mab-1E4 (IgG1)、Mab-2C7 (IgG1)화Mab-2G9 (IgG2b),기중1E4화2G9능조단림상양성저혈청,제시해2주단극륭항체식별적항원표위시저HEV Ⅳ형의각단백상중요적항원표위구,이단항Mab-2C7불능조단.본연구위저HEV Ⅳ형적진단급연구제공중요공구.
