中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2004年
8期
1507-1510
,共4页
邱云青%鲍朗%赵计林%赵明才%张会东%吴悦涵
邱雲青%鮑朗%趙計林%趙明纔%張會東%吳悅涵
구운청%포랑%조계림%조명재%장회동%오열함
基因敲除%基因,Rv0901%分枝杆菌,结核
基因敲除%基因,Rv0901%分枝桿菌,結覈
기인고제%기인,Rv0901%분지간균,결핵
目的:利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株,用于结核分枝杆菌基因Rv0901功能的研究.方法:结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养,对其Rv0901基因及两侧序列进行体外扩增,连接载体及目的片段,切除目的基因,再引入筛选标志构建重组自杀质粒,分别用酶切及PCR鉴定;用电穿孔法将重组自杀质粒转入结核杆菌H37RV株,用PCR鉴定.结果:经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符,且为所需目的基因片段,成功切除靶片段;蓝白斑筛选证实标记基因插入片段插入方向正确;Rv0901基因缺失株用PCR鉴定成功缺失了目的基因片段2.5kb.结论:成功构建了用于结核分枝杆菌基因打靶的置换型载体和Rv0901新基因缺失株,为Rv0901基因功能的研究莫定了基础.
目的:利用基因打靶技術構建基因打靶載體和基因缺失株,用于結覈分枝桿菌基因Rv0901功能的研究.方法:結覈分枝桿菌標準株H37Rv體外培養,對其Rv0901基因及兩側序列進行體外擴增,連接載體及目的片段,切除目的基因,再引入篩選標誌構建重組自殺質粒,分彆用酶切及PCR鑒定;用電穿孔法將重組自殺質粒轉入結覈桿菌H37RV株,用PCR鑒定.結果:經鑒定PCR產物及插入片段大小與預期值相符,且為所需目的基因片段,成功切除靶片段;藍白斑篩選證實標記基因插入片段插入方嚮正確;Rv0901基因缺失株用PCR鑒定成功缺失瞭目的基因片段2.5kb.結論:成功構建瞭用于結覈分枝桿菌基因打靶的置換型載體和Rv0901新基因缺失株,為Rv0901基因功能的研究莫定瞭基礎.
목적:이용기인타파기술구건기인타파재체화기인결실주,용우결핵분지간균기인Rv0901공능적연구.방법:결핵분지간균표준주H37Rv체외배양,대기Rv0901기인급량측서렬진행체외확증,련접재체급목적편단,절제목적기인,재인입사선표지구건중조자살질립,분별용매절급PCR감정;용전천공법장중조자살질립전입결핵간균H37RV주,용PCR감정.결과:경감정PCR산물급삽입편단대소여예기치상부,차위소수목적기인편단,성공절제파편단;람백반사선증실표기기인삽입편단삽입방향정학;Rv0901기인결실주용PCR감정성공결실료목적기인편단2.5kb.결론:성공구건료용우결핵분지간균기인타파적치환형재체화Rv0901신기인결실주,위Rv0901기인공능적연구막정료기출.
