CAJ | 학술논문

目的:探讨EGFR信号通路对人结肠癌Caco-2细胞增生、黏附和侵袭的影响及其分子机制.方法:应用细胞培养技术培养Caco-2细胞;以MTT法检测EGF,AG1478和PD98059对Caco-2细胞增生和生长的影响;Matrigel黏附实验、侵袭实验和RT-PCR技术检测EGF,AG1478和PD98059对Caco 2细胞黏附力、侵袭力和MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2基因转录的影响;Western blot蛋白免疫印迹法检测EGF和AG1478对Caco-2细胞P-EGFR蛋白表达的影响.结果:外源性EGF(10 μg/L)可明显地促进Caco-2细胞的增生和生长,24 h细胞生长率提高了23.4%(P＜0.01);而AG1478(20μmol/L)和PD98059(40μmol/L)则明显地抑制细胞的增生和生长,其抑制作用没有时间效应关系,AG1478最强抑制时间为第48 h,细胞生长率下降了45.7%(P＜0.01),PD98059最强抑制时间为第72 h,细胞生长率下降了54.6%(P＜0.01).Matrigel黏附实验、侵袭实验揭示了,EGF(10μg/L)提高EGFR活性后能明显地增加Caco-2细胞的体外黏附力(P＜0.05)和侵袭力(P=0.001);而且AG1478和PD98059分别阻断EGFR和ERK1/2后能使EGF的促细胞黏附力和侵袭力的作用消失(P＜0.01).RT-PCR测定显示,EGF能增加Caco-2细胞MMP-2,MMP-9 mRNA的表达,同时也能减少TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达;而AG1478和PD98059均能逆转EGF对Caco-2细胞基因的影响,使MMP-2和MMP-9mRNA的表达下降,TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达上升,结果MMP-2/TIMP-2比值和MMP-9/TIMP-1比值均下降(P＜0.001).结论:EGFR信号可能通过下游MAPK通路传递信息,改变MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2基因功能,从而有助于结肠癌Caco-2细胞的侵袭与转移.
목적:탐토EGFR신호통로대인결장암Caco-2세포증생、점부화침습적영향급기분자궤제.방법:응용세포배양기술배양Caco-2세포;이MTT법검측EGF,AG1478화PD98059대Caco-2세포증생화생장적영향;Matrigel점부실험、침습실험화RT-PCR기술검측EGF,AG1478화PD98059대Caco 2세포점부력、침습력화MMP-2,MMP-9,TIMP-1화TIMP-2기인전록적영향;Western blot단백면역인적법검측EGF화AG1478대Caco-2세포P-EGFR단백표체적영향.결과:외원성EGF(10 μg/L)가명현지촉진Caco-2세포적증생화생장,24 h세포생장솔제고료23.4%(P＜0.01);이AG1478(20μmol/L)화PD98059(40μmol/L)칙명현지억제세포적증생화생장,기억제작용몰유시간효응관계,AG1478최강억제시간위제48 h,세포생장솔하강료45.7%(P＜0.01),PD98059최강억제시간위제72 h,세포생장솔하강료54.6%(P＜0.01).Matrigel점부실험、침습실험게시료,EGF(10μg/L)제고EGFR활성후능명현지증가Caco-2세포적체외점부력(P＜0.05)화침습력(P=0.001);이차AG1478화PD98059분별조단EGFR화ERK1/2후능사EGF적촉세포점부력화침습력적작용소실(P＜0.01).RT-PCR측정현시,EGF능증가Caco-2세포MMP-2,MMP-9 mRNA적표체,동시야능감소TIMP-1화TIMP-2 mRNA적표체;이AG1478화PD98059균능역전EGF대Caco-2세포기인적영향,사MMP-2화MMP-9mRNA적표체하강,TIMP-1화TIMP-2 mRNA적표체상승,결과MMP-2/TIMP-2비치화MMP-9/TIMP-1비치균하강(P＜0.001).결론:EGFR신호가능통과하유MAPK통로전체신식,개변MMP-2,MMP-9,TIMP-1화TIMP-2기인공능,종이유조우결장암Caco-2세포적침습여전이.