CAJ | 학술논문

目的:在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白,观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性,并了解其是否有剂量依赖性.方法:实验于2005-08/2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成.①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni2+亲和层析纯化.②细胞增殖抑制实验:取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中,培养12 h后加入终浓度分别为0,10,20,30,50,50mg/L融合蛋白培养48 h,弃上清,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液(5g/L)20μL,继续孵育4 h,检测吸光度,计算肿瘤生长抑制率.③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞,每种细胞分成两组:给药组加入终浓度为30 mg/L穿膜肽-凋亡蛋白,对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液,继续培养48 h.苏木精-伊红染色,光镜下观察细胞形态;溴乙啶/丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率.结果:①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50 mg/L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用,对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用,半数抑制浓度为27 mg/L.②30 mg/L穿膜肽-凋亡蛋白作用48 h后,人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变,对照组和给药组的凋亡率分别为(2.9±0.4)%和(3.1±0.6)%,没有显著差异(P＞0.05);Anip973细胞可见到细胞皱缩,染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化,给药组和对照组凋亡率分别为(36.8±1.7)%和(6.7±0.5)%,差异显著(P＜0.01).结论:穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖性,而对正常细胞没有毒性作用.
목적:재대장간균내표체천막태여조망단백적융합단백,관찰기유도폐선암Anip973세포조망적활성,병료해기시부유제량의뢰성.방법:실험우2005-08/2006-01재합이빈의과대학생물화학여분자생물학교연실완성.①재대장간균중표체천막태-조망단백병용IDA-Ni2+친화층석순화.②세포증식억제실험:취대수생장기인제정맥내피세포화Anip973세포접충우96공배양판중,배양12 h후가입종농도분별위0,10,20,30,50,50mg/L융합단백배양48 h,기상청,매공중가입사갑기우담서염용액(5g/L)20μL,계속부육4 h,검측흡광도,계산종류생장억제솔.③취대수생장기인제정맥내피세포、Anip973세포,매충세포분성량조:급약조가입종농도위30 mg/L천막태-조망단백,대조조가입상동체적적린산염완충액,계속배양48 h.소목정-이홍염색,광경하관찰세포형태;추을정/아정등형광염색관찰세포조망솔.결과:①세포증식억제실험결과표명농도위10～50 mg/L천막태-조망단백대인제정맥내피세포몰유명현억제작용,대Anip973세포정제량의뢰성억제작용,반수억제농도위27 mg/L.②30 mg/L천막태-조망단백작용48 h후,인제정맥내피세포형태몰유현저개변,대조조화급약조적조망솔분별위(2.9±0.4)%화(3.1±0.6)%,몰유현저차이(P＞0.05);Anip973세포가견도세포추축,염색질농축화출현조망소체등조망특정성형태변화,급약조화대조조조망솔분별위(36.8±1.7)%화(6.7±0.5)%,차이현저(P＜0.01).결론:천막태-조망단백능유도종류세포조망,저충작용정제량의뢰성,이대정상세포몰유독성작용.