中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
29期
5792-5796
,共5页
天花粉蛋白%黑色素瘤B16细胞%DNA损伤
天花粉蛋白%黑色素瘤B16細胞%DNA損傷
천화분단백%흑색소류B16세포%DNA손상
目的:应用异硫氰酸荧光素标记天花粉蛋白,在激光共聚焦显微镜下直接观察天花粉蛋白进入黑色素瘤B16细胞的动态过程并分析其对黑色瘤B16细胞的损伤作用. 方法:实验于2003-08/2004-08在南通大学神经再生重点实验室完成.将常规传代培养的黑色素瘤B16细胞用胰酶消化,以5×109个/L的浓度种植于24孔培养板.将天花粉蛋白、异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白、异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白分别加入培养细胞中,终浓度为50 mg/L,同时加入等量生理盐水作为正常对照组,每组再分别设3,6,12 h不同孵育时间组.异硫氰酸荧光素标记天花粉蛋白后,利用激光共聚焦显微镜观察异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白进入细胞的过程及其荧光强度,CCK-8细胞毒性实验评估各组细胞存活率、并用单细胞凝胶电泳及hoechst33258染核观察天花粉蛋白对黑色素瘤B16细胞致DNA损伤作用.结果:①终浓度50 mg/L的异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白孵育3 h时已经进入黑色素瘤细胞,6 h时进入细胞量达到最高,12 h时已轻度下降,各时间点比较差异有统计学意义(P＜0.01).异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白组与异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白组荧光强度差异有显著性(P＜0.01).②终浓度50 mg/L异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白、天花粉蛋白孵育黑色素瘤细胞3,6 h后利用单细胞电泳和Hoechst33258染色未观察到核形态的变化;但孵育6 h后CCK-8细胞毒性实验显示活细胞数量明显下降;孵育12 h后出现DNA损伤的特征性彗星尾现象,并观察到明显的核浓缩和边集现象,出现特征性凋亡小体.结论:孵育6 h时天花粉蛋白进入细胞量最多,但并没有明显的细胞DNA损伤的作用,而孵育12 h时产生明显的细胞毒作用和凋亡的发生.
目的:應用異硫氰痠熒光素標記天花粉蛋白,在激光共聚焦顯微鏡下直接觀察天花粉蛋白進入黑色素瘤B16細胞的動態過程併分析其對黑色瘤B16細胞的損傷作用. 方法:實驗于2003-08/2004-08在南通大學神經再生重點實驗室完成.將常規傳代培養的黑色素瘤B16細胞用胰酶消化,以5×109箇/L的濃度種植于24孔培養闆.將天花粉蛋白、異硫氰痠熒光素-天花粉蛋白、異硫氰痠熒光素-牛血清白蛋白分彆加入培養細胞中,終濃度為50 mg/L,同時加入等量生理鹽水作為正常對照組,每組再分彆設3,6,12 h不同孵育時間組.異硫氰痠熒光素標記天花粉蛋白後,利用激光共聚焦顯微鏡觀察異硫氰痠熒光素-天花粉蛋白進入細胞的過程及其熒光彊度,CCK-8細胞毒性實驗評估各組細胞存活率、併用單細胞凝膠電泳及hoechst33258染覈觀察天花粉蛋白對黑色素瘤B16細胞緻DNA損傷作用.結果:①終濃度50 mg/L的異硫氰痠熒光素-天花粉蛋白孵育3 h時已經進入黑色素瘤細胞,6 h時進入細胞量達到最高,12 h時已輕度下降,各時間點比較差異有統計學意義(P＜0.01).異硫氰痠熒光素-天花粉蛋白組與異硫氰痠熒光素-牛血清白蛋白組熒光彊度差異有顯著性(P＜0.01).②終濃度50 mg/L異硫氰痠熒光素-天花粉蛋白、天花粉蛋白孵育黑色素瘤細胞3,6 h後利用單細胞電泳和Hoechst33258染色未觀察到覈形態的變化;但孵育6 h後CCK-8細胞毒性實驗顯示活細胞數量明顯下降;孵育12 h後齣現DNA損傷的特徵性彗星尾現象,併觀察到明顯的覈濃縮和邊集現象,齣現特徵性凋亡小體.結論:孵育6 h時天花粉蛋白進入細胞量最多,但併沒有明顯的細胞DNA損傷的作用,而孵育12 h時產生明顯的細胞毒作用和凋亡的髮生.
목적:응용이류청산형광소표기천화분단백,재격광공취초현미경하직접관찰천화분단백진입흑색소류B16세포적동태과정병분석기대흑색류B16세포적손상작용. 방법:실험우2003-08/2004-08재남통대학신경재생중점실험실완성.장상규전대배양적흑색소류B16세포용이매소화,이5×109개/L적농도충식우24공배양판.장천화분단백、이류청산형광소-천화분단백、이류청산형광소-우혈청백단백분별가입배양세포중,종농도위50 mg/L,동시가입등량생리염수작위정상대조조,매조재분별설3,6,12 h불동부육시간조.이류청산형광소표기천화분단백후,이용격광공취초현미경관찰이류청산형광소-천화분단백진입세포적과정급기형광강도,CCK-8세포독성실험평고각조세포존활솔、병용단세포응효전영급hoechst33258염핵관찰천화분단백대흑색소류B16세포치DNA손상작용.결과:①종농도50 mg/L적이류청산형광소-천화분단백부육3 h시이경진입흑색소류세포,6 h시진입세포량체도최고,12 h시이경도하강,각시간점비교차이유통계학의의(P＜0.01).이류청산형광소-천화분단백조여이류청산형광소-우혈청백단백조형광강도차이유현저성(P＜0.01).②종농도50 mg/L이류청산형광소-천화분단백、천화분단백부육흑색소류세포3,6 h후이용단세포전영화Hoechst33258염색미관찰도핵형태적변화;단부육6 h후CCK-8세포독성실험현시활세포수량명현하강;부육12 h후출현DNA손상적특정성혜성미현상,병관찰도명현적핵농축화변집현상,출현특정성조망소체.결론:부육6 h시천화분단백진입세포량최다,단병몰유명현적세포DNA손상적작용,이부육12 h시산생명현적세포독작용화조망적발생.
