中国热带医学
中國熱帶醫學
중국열대의학
CHINA TROPICAL MEDICINE
2008年
4期
527-529
,共3页
陈雪艳%付玉才%李璐%耿艺介%黄达娜%高世同%张仁利
陳雪豔%付玉纔%李璐%耿藝介%黃達娜%高世同%張仁利
진설염%부옥재%리로%경예개%황체나%고세동%장인리
弓形虫%Calpain(依钙蛋白酶)-lik%基因克隆%RT-PCR
弓形蟲%Calpain(依鈣蛋白酶)-lik%基因剋隆%RT-PCR
궁형충%Calpain(의개단백매)-lik%기인극륭%RT-PCR
目的 克隆弓形虫RH株Calpain(依钙蛋白酶)-like基因,分析免疫生物学功能,筛选预防弓形虫感染的疫苗候选分子. 方法 利用人类、鼠类和其它寄生虫的Calpain基因同源性比较的保守区域合成混合引物,以弓形虫的RNA为模板.应用RT-PCR扩增弓形虫Calpain-like 基因片段,扩增的片段通过TA克隆插入克隆载体pET32A,筛选阳性克隆进行双酶切鉴定和DNA序列分析,用克隆的基因片段制备特异性基因探针,经Northern blot技术证实弓形虫Calpain-like基因mRNA. 结果 RT-PCR扩增了316bp弓形虫Calpmn-like基因,其DNA序列与日本血吸虫Calpain基因同一区域的同源性为70%,与计算机推测的弓形虫Calpain-like基因的同源性为100%.Northern blot显示了弓形虫Calpmn-like基因mRNA的大小约6300bp. 结论 弓形虫RH株基因组中存在Calpmn-like基因,Calpain-like基因在弓形虫RH株中高度表达.
目的 剋隆弓形蟲RH株Calpain(依鈣蛋白酶)-like基因,分析免疫生物學功能,篩選預防弓形蟲感染的疫苗候選分子. 方法 利用人類、鼠類和其它寄生蟲的Calpain基因同源性比較的保守區域閤成混閤引物,以弓形蟲的RNA為模闆.應用RT-PCR擴增弓形蟲Calpain-like 基因片段,擴增的片段通過TA剋隆插入剋隆載體pET32A,篩選暘性剋隆進行雙酶切鑒定和DNA序列分析,用剋隆的基因片段製備特異性基因探針,經Northern blot技術證實弓形蟲Calpain-like基因mRNA. 結果 RT-PCR擴增瞭316bp弓形蟲Calpmn-like基因,其DNA序列與日本血吸蟲Calpain基因同一區域的同源性為70%,與計算機推測的弓形蟲Calpain-like基因的同源性為100%.Northern blot顯示瞭弓形蟲Calpmn-like基因mRNA的大小約6300bp. 結論 弓形蟲RH株基因組中存在Calpmn-like基因,Calpain-like基因在弓形蟲RH株中高度錶達.
목적 극륭궁형충RH주Calpain(의개단백매)-like기인,분석면역생물학공능,사선예방궁형충감염적역묘후선분자. 방법 이용인류、서류화기타기생충적Calpain기인동원성비교적보수구역합성혼합인물,이궁형충적RNA위모판.응용RT-PCR확증궁형충Calpain-like 기인편단,확증적편단통과TA극륭삽입극륭재체pET32A,사선양성극륭진행쌍매절감정화DNA서렬분석,용극륭적기인편단제비특이성기인탐침,경Northern blot기술증실궁형충Calpain-like기인mRNA. 결과 RT-PCR확증료316bp궁형충Calpmn-like기인,기DNA서렬여일본혈흡충Calpain기인동일구역적동원성위70%,여계산궤추측적궁형충Calpain-like기인적동원성위100%.Northern blot현시료궁형충Calpmn-like기인mRNA적대소약6300bp. 결론 궁형충RH주기인조중존재Calpmn-like기인,Calpain-like기인재궁형충RH주중고도표체.
