基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2008年
6期
623-626
,共4页
王林%谭锋维%陈实平%陆丽芳%龚燕华%彭小忠
王林%譚鋒維%陳實平%陸麗芳%龔燕華%彭小忠
왕림%담봉유%진실평%륙려방%공연화%팽소충
SUMO%蛋白表达纯化%单克隆抗体
SUMO%蛋白錶達純化%單剋隆抗體
SUMO%단백표체순화%단극륭항체
目的 表达重组人SUMO1(small ubiquitin-related modifier 1)蛋白并制备单克隆抗体.方法 构建含人SUMO1基因的重组表达质粒pET32a-HIS-SUMO1,在大肠杆菌中表达重组蛋白HIS-SUMO1;以纯化后的HIS-SUMO1蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,通过ELISA和Western blot方法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定抗体Ig的类型及亚类;取一株筛选细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore抗体纯化试剂盒进行抗体纯化,Western blot方法检测抗体效价.结果 表达纯化了重组人HIS-SUMO1蛋白;3株稳定分泌特异性抗人SUMO1的单克隆抗体杂交瘤细胞株被筛选出,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得效价较高的鼠抗人SUMO1单克隆抗体.结论 通过表达纯化人SUMO1重组蛋白,制备出高效价鼠抗人SUMO1的单克隆抗体,该抗体可用于蛋白质SUMO化的研究.
目的 錶達重組人SUMO1(small ubiquitin-related modifier 1)蛋白併製備單剋隆抗體.方法 構建含人SUMO1基因的重組錶達質粒pET32a-HIS-SUMO1,在大腸桿菌中錶達重組蛋白HIS-SUMO1;以純化後的HIS-SUMO1蛋白為抗原免疫BALB/c小鼠,利用雜交瘤技術,通過ELISA和Western blot方法篩選穩定分泌抗體的雜交瘤細胞株,用免疫雙嚮擴散法鑒定抗體Ig的類型及亞類;取一株篩選細胞按照常規方法製備腹水,利用Millipore抗體純化試劑盒進行抗體純化,Western blot方法檢測抗體效價.結果 錶達純化瞭重組人HIS-SUMO1蛋白;3株穩定分泌特異性抗人SUMO1的單剋隆抗體雜交瘤細胞株被篩選齣,其免疫毬蛋白類型均為IgG1類;通過腹水製備和純化穫得效價較高的鼠抗人SUMO1單剋隆抗體.結論 通過錶達純化人SUMO1重組蛋白,製備齣高效價鼠抗人SUMO1的單剋隆抗體,該抗體可用于蛋白質SUMO化的研究.
목적 표체중조인SUMO1(small ubiquitin-related modifier 1)단백병제비단극륭항체.방법 구건함인SUMO1기인적중조표체질립pET32a-HIS-SUMO1,재대장간균중표체중조단백HIS-SUMO1;이순화후적HIS-SUMO1단백위항원면역BALB/c소서,이용잡교류기술,통과ELISA화Western blot방법사선은정분비항체적잡교류세포주,용면역쌍향확산법감정항체Ig적류형급아류;취일주사선세포안조상규방법제비복수,이용Millipore항체순화시제합진행항체순화,Western blot방법검측항체효개.결과 표체순화료중조인HIS-SUMO1단백;3주은정분비특이성항인SUMO1적단극륭항체잡교류세포주피사선출,기면역구단백류형균위IgG1류;통과복수제비화순화획득효개교고적서항인SUMO1단극륭항체.결론 통과표체순화인SUMO1중조단백,제비출고효개서항인SUMO1적단극륭항체,해항체가용우단백질SUMO화적연구.
