生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2009年
1期
42-48
,共7页
付玉荣%伊正君%李猛%邵丽军%宋淑亚
付玉榮%伊正君%李猛%邵麗軍%宋淑亞
부옥영%이정군%리맹%소려군%송숙아
凋亡诱导凶子%细胞%基质辅助激光解析电离飞行时间质谱%免疫共沉淀
凋亡誘導兇子%細胞%基質輔助激光解析電離飛行時間質譜%免疫共沉澱
조망유도흉자%세포%기질보조격광해석전리비행시간질보%면역공침정
线粒体凋亡诱导因子(AIF)是一类存在于线粒体内外膜之间保守的黄素蛋白,它从线粒体到细胞核的转何可诱导细胞凋亡.AIF诱导细胞凋亡的确切机制还小是很清楚.为了筛选可能与截断型AIF存在相互作用的蛋白质,探讨截断型AIF诱导细胞凋亡的机制,用逆转录PcR扩增剪切掉线粒体定位信号的人AIF基因片段并克隆入pcDNA3.1载体,导入肝癌HepG2细胞.成功检测到截断型布转录与翻译水平上的表达.提取转染截断型AIF基因的细胞的蛋白质,用免疫沉淀方法分离上j截断型可能存在相互作卅的蛋白质,用基质辅助激光解析电离飞行行时间质谱对分离得到的蛋白质进行鉴定,其中一蛋白质条带经鉴定为β-adctin.冉次用反向免疫共沉淀法与westem blot法对筛选出的可能相互作用蛋白质进行验证.结果表明,截断型AIF与β-actin之间可能存在相互作用.
線粒體凋亡誘導因子(AIF)是一類存在于線粒體內外膜之間保守的黃素蛋白,它從線粒體到細胞覈的轉何可誘導細胞凋亡.AIF誘導細胞凋亡的確切機製還小是很清楚.為瞭篩選可能與截斷型AIF存在相互作用的蛋白質,探討截斷型AIF誘導細胞凋亡的機製,用逆轉錄PcR擴增剪切掉線粒體定位信號的人AIF基因片段併剋隆入pcDNA3.1載體,導入肝癌HepG2細胞.成功檢測到截斷型佈轉錄與翻譯水平上的錶達.提取轉染截斷型AIF基因的細胞的蛋白質,用免疫沉澱方法分離上j截斷型可能存在相互作卅的蛋白質,用基質輔助激光解析電離飛行行時間質譜對分離得到的蛋白質進行鑒定,其中一蛋白質條帶經鑒定為β-adctin.冉次用反嚮免疫共沉澱法與westem blot法對篩選齣的可能相互作用蛋白質進行驗證.結果錶明,截斷型AIF與β-actin之間可能存在相互作用.
선립체조망유도인자(AIF)시일류존재우선립체내외막지간보수적황소단백,타종선립체도세포핵적전하가유도세포조망.AIF유도세포조망적학절궤제환소시흔청초.위료사선가능여절단형AIF존재상호작용적단백질,탐토절단형AIF유도세포조망적궤제,용역전록PcR확증전절도선립체정위신호적인AIF기인편단병극륭입pcDNA3.1재체,도입간암HepG2세포.성공검측도절단형포전록여번역수평상적표체.제취전염절단형AIF기인적세포적단백질,용면역침정방법분리상j절단형가능존재상호작삽적단백질,용기질보조격광해석전리비행행시간질보대분리득도적단백질진행감정,기중일단백질조대경감정위β-adctin.염차용반향면역공침정법여westem blot법대사선출적가능상호작용단백질진행험증.결과표명,절단형AIF여β-actin지간가능존재상호작용.
