CAJ | 학술논문

目的:合成并筛选有效抑制parp10表达的siRNA.方法:根据parp10 cDNA序列,设计并合成prap10基因潜在的RNA干扰(RNAi)片段,将合成的寡核苷酸序列构建到pEGFP-C1H1U6载体中;通过双萤光素酶试验、Western blotting筛选有效的干扰序列;进一步用G418对A549细胞进行耐受度筛选,确定最低耐受度;用G418溶液对转染RNAi重组质粒的A549细胞进行筛选,通过RT-PCR鉴定干扰效果.结果:针对617 bp处所构建的RNAi载体能够抑制PARP10的表达,用浓度为400 μg/mL G418的McCoy′s 5A培养基筛选转染后的细胞,获得了能够表达绿色荧光标签蛋白的A549细胞株,经RT-PCR检测发现,PARP10表达受到抑制.结论:获得了能够有效抑制PARP10表达的特异性小干扰RNA(siRNA),为进一步研究其生物学功能提供了条件.
목적:합성병사선유효억제parp10표체적siRNA.방법:근거parp10 cDNA서렬,설계병합성prap10기인잠재적RNA간우(RNAi)편단,장합성적과핵감산서렬구건도pEGFP-C1H1U6재체중;통과쌍형광소매시험、Western blotting사선유효적간우서렬;진일보용G418대A549세포진행내수도사선,학정최저내수도;용G418용액대전염RNAi중조질립적A549세포진행사선,통과RT-PCR감정간우효과.결과:침대617 bp처소구건적RNAi재체능구억제PARP10적표체,용농도위400 μg/mL G418적McCoy′s 5A배양기사선전염후적세포,획득료능구표체록색형광표첨단백적A549세포주,경RT-PCR검측발현,PARP10표체수도억제.결론:획득료능구유효억제PARP10표체적특이성소간우RNA(siRNA),위진일보연구기생물학공능제공료조건.