CAJ | 학술논문

背景:非病毒载体因其安全性好而在基因治疗领域赢得了广泛的关注,各种各样的非病毒载体处在不断的研究中,壳聚糖季铵盐作为一种新的生物材料,同样也具有作为基因递送载体的潜质.目的:考察壳聚糖季铵盐体外基因转染活性,寻求一种新的非病毒基因载体递送系统.设计、时间及单位:对比观察实验,于2008-04/12在浙江省医学科学院生物工程所完成.材料:质粒pcDNA3.1-EGFP为浙江省医学科学院生物工程实验室保存.以3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵作为改性剂制备壳聚糖季铵盐,用复凝聚法制备载基因纳米粒.方法:凝胶阻滞实验分析壳聚糖季铵盐包裹质粒的能力,DNase Ⅰ的保护实验分析载基因纳米粒的抵抗核酸酶降解的能力,体外基因转染实验评价纳米粒的体外转染活性,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果.通过考察转染液中有无牛血清和递送不同剂量的基因对转染效率的影响,寻求本递送系统较好的转染条件.另外,用MTT法测定壳聚糖季铵盐的细胞毒性.主要观察指标:壳聚糖季铵盐和pcDNA 3.1-EGFP以何种比例结合形成的纳米粒、转染液中有无牛血清,质粒的量为多少时对人胚肾T细胞的转染效率足最高的;不同浓度的壳聚糖季铵盐对细胞生长的影响.结果:壳聚糖季钱盐纳米粒能转入人胚肾T细胞,虽然转染效率略逊丁聚乙烯亚胺,但是细胞毒性明显小于聚乙烯亚胺.壳聚糖季铵盐纳米粒转染细胞72 h后效率较高,经综合分析,当pcDNA质量为2 μg,壳聚糖季铵盐和pcDNA以质量比为5结合形成的纳米粒,在无血清条件下对人胚肾T细胞进行转染,转染效率足最高的.结论:壳聚糖季铵盐纳米粒能将基因递送到细胞内,并且报告基因能在细胞内表达.因此,壳聚糖季铵盐用做基因递送的载体系统值得进一步的研究.
배경:비병독재체인기안전성호이재기인치료영역영득료엄범적관주,각충각양적비병독재체처재불단적연구중,각취당계안염작위일충신적생물재료,동양야구유작위기인체송재체적잠질.목적:고찰각취당계안염체외기인전염활성,심구일충신적비병독기인재체체송계통.설계、시간급단위:대비관찰실험,우2008-04/12재절강성의학과학원생물공정소완성.재료:질립pcDNA3.1-EGFP위절강성의학과학원생물공정실험실보존.이3-록-2-간병기삼갑기록화안작위개성제제비각취당계안염,용복응취법제비재기인납미립.방법:응효조체실험분석각취당계안염포과질립적능력,DNase Ⅰ적보호실험분석재기인납미립적저항핵산매강해적능력,체외기인전염실험평개납미립적체외전염활성,용도치형광현미경관찰화류식세포의측정전염결과.통과고찰전염액중유무우혈청화체송불동제량적기인대전염효솔적영향,심구본체송계통교호적전염조건.령외,용MTT법측정각취당계안염적세포독성.주요관찰지표:각취당계안염화pcDNA 3.1-EGFP이하충비례결합형성적납미립、전염액중유무우혈청,질립적량위다소시대인배신T세포적전염효솔족최고적;불동농도적각취당계안염대세포생장적영향.결과:각취당계전염납미립능전입인배신T세포,수연전염효솔략손정취을희아알,단시세포독성명현소우취을희아알.각취당계안염납미립전염세포72 h후효솔교고,경종합분석,당pcDNA질량위2 μg,각취당계안염화pcDNA이질량비위5결합형성적납미립,재무혈청조건하대인배신T세포진행전염,전염효솔족최고적.결론:각취당계안염납미립능장기인체송도세포내,병차보고기인능재세포내표체.인차,각취당계안염용주기인체송적재체계통치득진일보적연구.