中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
19期
3656-3660
,共5页
曾祥一%王伟%孙亮%张力%曾令达
曾祥一%王偉%孫亮%張力%曾令達
증상일%왕위%손량%장력%증령체
成肌细胞%分化%丹参注射液%睫状神经因子%p42/p44激酶
成肌細胞%分化%丹參註射液%睫狀神經因子%p42/p44激酶
성기세포%분화%단삼주사액%첩상신경인자%p42/p44격매
背景:睫状神经因子通过细胞表面的受体可以使成肌细胞去分化而转变为多能性干细胞,而p44/p42激酶可以进一步激活睫状神经因子下游基因的表达,与细胞去分化密切相关.目的:观察丹参注射液诱导成肌细胞分化成神经元的细胞模型中p42/p44激酶磷酸化的情况.设计、时间及地点:细胞分子水平实验,于2008-03/06在辽宁医学院附属第二医院口腔科学实验室完成.材料:清洁级新生1周SD大鼠1只,由辽宁医学院实验动物中心提供.丹参注射液为四川三精升和制药有限公司产品,批号080717.主要成分为丹参.睫状神经营养因子为Sigma产品.方法:体外分离培养大鼠成肌细胞,传至第5代接种于6孔板内,诱导组使用50μg/L睫状神经因子预诱导72 h,再更换含复方丹参注射液的无血清DMEM培养基诱导10 h;对照组使用不含复方丹参注射液的无血清DMEM培养基处理.取诱导后的成肌细胞,加入p44/p42激酶抑制剂PD98059进行干预处理.主要观察指标:western blotting法检测诱导后成肌细胞蛋白标记物MyoD,Myf5的表达,神经元蛋白标记物酪氨酸羟化酶、神经丝的表达,以及p44/p42激酶在成肌细胞蛋白标记物下调过程中的作用.结果:与未诱导的对照组比较,培养的成肌细胞经睫状神经因子预诱导、再加入丹参注射液诱导的过程中,成肌细胞蛋白标记物MyoD,Myf5的表达均明显下调;而诱导后期神经元特异蛋白标记物酪氨酸羟化酶、神经丝的表达增高.丹参诱导后成肌细胞p44/p42激酶发生磷酸化,同时MyoD和Myf5的表达量下调:在p44/p42激酶抑制剂PD98059存在情况下,p44/p42激酶磷酸化及MyoD,Myf5表达量下调均被抑制.结论:经睫状神经因子预诱导后逐渐去分化的成肌细胞,在丹参注射液的诱导下能够成功分化为表达神经元特异蛋白标记物的神经元样细胞,p44/p42激酶通过磷酸化参与了成肌细胞的再分化过程.
揹景:睫狀神經因子通過細胞錶麵的受體可以使成肌細胞去分化而轉變為多能性榦細胞,而p44/p42激酶可以進一步激活睫狀神經因子下遊基因的錶達,與細胞去分化密切相關.目的:觀察丹參註射液誘導成肌細胞分化成神經元的細胞模型中p42/p44激酶燐痠化的情況.設計、時間及地點:細胞分子水平實驗,于2008-03/06在遼寧醫學院附屬第二醫院口腔科學實驗室完成.材料:清潔級新生1週SD大鼠1隻,由遼寧醫學院實驗動物中心提供.丹參註射液為四川三精升和製藥有限公司產品,批號080717.主要成分為丹參.睫狀神經營養因子為Sigma產品.方法:體外分離培養大鼠成肌細胞,傳至第5代接種于6孔闆內,誘導組使用50μg/L睫狀神經因子預誘導72 h,再更換含複方丹參註射液的無血清DMEM培養基誘導10 h;對照組使用不含複方丹參註射液的無血清DMEM培養基處理.取誘導後的成肌細胞,加入p44/p42激酶抑製劑PD98059進行榦預處理.主要觀察指標:western blotting法檢測誘導後成肌細胞蛋白標記物MyoD,Myf5的錶達,神經元蛋白標記物酪氨痠羥化酶、神經絲的錶達,以及p44/p42激酶在成肌細胞蛋白標記物下調過程中的作用.結果:與未誘導的對照組比較,培養的成肌細胞經睫狀神經因子預誘導、再加入丹參註射液誘導的過程中,成肌細胞蛋白標記物MyoD,Myf5的錶達均明顯下調;而誘導後期神經元特異蛋白標記物酪氨痠羥化酶、神經絲的錶達增高.丹參誘導後成肌細胞p44/p42激酶髮生燐痠化,同時MyoD和Myf5的錶達量下調:在p44/p42激酶抑製劑PD98059存在情況下,p44/p42激酶燐痠化及MyoD,Myf5錶達量下調均被抑製.結論:經睫狀神經因子預誘導後逐漸去分化的成肌細胞,在丹參註射液的誘導下能夠成功分化為錶達神經元特異蛋白標記物的神經元樣細胞,p44/p42激酶通過燐痠化參與瞭成肌細胞的再分化過程.
배경:첩상신경인자통과세포표면적수체가이사성기세포거분화이전변위다능성간세포,이p44/p42격매가이진일보격활첩상신경인자하유기인적표체,여세포거분화밀절상관.목적:관찰단삼주사액유도성기세포분화성신경원적세포모형중p42/p44격매린산화적정황.설계、시간급지점:세포분자수평실험,우2008-03/06재료녕의학원부속제이의원구강과학실험실완성.재료:청길급신생1주SD대서1지,유료녕의학원실험동물중심제공.단삼주사액위사천삼정승화제약유한공사산품,비호080717.주요성분위단삼.첩상신경영양인자위Sigma산품.방법:체외분리배양대서성기세포,전지제5대접충우6공판내,유도조사용50μg/L첩상신경인자예유도72 h,재경환함복방단삼주사액적무혈청DMEM배양기유도10 h;대조조사용불함복방단삼주사액적무혈청DMEM배양기처리.취유도후적성기세포,가입p44/p42격매억제제PD98059진행간예처리.주요관찰지표:western blotting법검측유도후성기세포단백표기물MyoD,Myf5적표체,신경원단백표기물락안산간화매、신경사적표체,이급p44/p42격매재성기세포단백표기물하조과정중적작용.결과:여미유도적대조조비교,배양적성기세포경첩상신경인자예유도、재가입단삼주사액유도적과정중,성기세포단백표기물MyoD,Myf5적표체균명현하조;이유도후기신경원특이단백표기물락안산간화매、신경사적표체증고.단삼유도후성기세포p44/p42격매발생린산화,동시MyoD화Myf5적표체량하조:재p44/p42격매억제제PD98059존재정황하,p44/p42격매린산화급MyoD,Myf5표체량하조균피억제.결론:경첩상신경인자예유도후축점거분화적성기세포,재단삼주사액적유도하능구성공분화위표체신경원특이단백표기물적신경원양세포,p44/p42격매통과린산화삼여료성기세포적재분화과정.
