水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2012年
2期
212-219
,共8页
辛瑞晓%易飞%张蕊%徐涛%玄璞%刘瑞%贾俊涛%陈吉祥
辛瑞曉%易飛%張蕊%徐濤%玄璞%劉瑞%賈俊濤%陳吉祥
신서효%역비%장예%서도%현박%류서%가준도%진길상
哈维氏弧菌%超氧化物歧化酶%基因%表达%性质%免疫原性
哈維氏弧菌%超氧化物歧化酶%基因%錶達%性質%免疫原性
합유씨호균%초양화물기화매%기인%표체%성질%면역원성
哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是鱼虾等海水动物的重要病原菌.超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)通过催化超氧阴离子自由基(O-2)形成O2和H2O2,以保持细胞自由基产生和清除之间的平衡,在病原菌适应环境及细菌致病性方面发挥重要作用.用PCR从哈维氏弧菌基因组扩增得到600 bp的目的片段,序列分析表明与弧菌Fe-SOD的序列相似性为91％-99％.将目的基因片段克隆到原核表达载体进行表达.SDS-PAGE电泳分析显示纯化的蛋白为单一条带,分子量为27kD.具有典型的Fe-SOD吸收光谱,对氯仿-乙醇和H2O2敏感,表明纯化的蛋白属于Fe-SOD.用邻苯三酚自氧化法测得酶的最适pH 7,最适温度20℃.该酶在pH6-8的范围内稳定,当温度超过40℃时酶的活力迅速丧失.纯化的重组蛋白免疫大菱鲆,4周后用致病性哈维氏弧菌进行人工感染试验,对大菱鲆的免疫保护率为80.00％.Western blot可以检测到免疫大菱鲆的血清中的特异抗体.
哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)是魚蝦等海水動物的重要病原菌.超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)通過催化超氧陰離子自由基(O-2)形成O2和H2O2,以保持細胞自由基產生和清除之間的平衡,在病原菌適應環境及細菌緻病性方麵髮揮重要作用.用PCR從哈維氏弧菌基因組擴增得到600 bp的目的片段,序列分析錶明與弧菌Fe-SOD的序列相似性為91％-99％.將目的基因片段剋隆到原覈錶達載體進行錶達.SDS-PAGE電泳分析顯示純化的蛋白為單一條帶,分子量為27kD.具有典型的Fe-SOD吸收光譜,對氯倣-乙醇和H2O2敏感,錶明純化的蛋白屬于Fe-SOD.用鄰苯三酚自氧化法測得酶的最適pH 7,最適溫度20℃.該酶在pH6-8的範圍內穩定,噹溫度超過40℃時酶的活力迅速喪失.純化的重組蛋白免疫大蔆鲆,4週後用緻病性哈維氏弧菌進行人工感染試驗,對大蔆鲆的免疫保護率為80.00％.Western blot可以檢測到免疫大蔆鲆的血清中的特異抗體.
합유씨호균(Vibrio harveyi)시어하등해수동물적중요병원균.초양화물기화매(Superoxide dismutase)통과최화초양음리자자유기(O-2)형성O2화H2O2,이보지세포자유기산생화청제지간적평형,재병원균괄응배경급세균치병성방면발휘중요작용.용PCR종합유씨호균기인조확증득도600 bp적목적편단,서렬분석표명여호균Fe-SOD적서렬상사성위91％-99％.장목적기인편단극륭도원핵표체재체진행표체.SDS-PAGE전영분석현시순화적단백위단일조대,분자량위27kD.구유전형적Fe-SOD흡수광보,대록방-을순화H2O2민감,표명순화적단백속우Fe-SOD.용린분삼분자양화법측득매적최괄pH 7,최괄온도20℃.해매재pH6-8적범위내은정,당온도초과40℃시매적활력신속상실.순화적중조단백면역대릉평,4주후용치병성합유씨호균진행인공감염시험,대대릉평적면역보호솔위80.00％.Western blot가이검측도면역대릉평적혈청중적특이항체.
