CAJ | 학술논문

抗菌肽是在多种细胞中表达具有抗菌活性的肽类物质的总称,在免疫反应中发挥着非常重要的作用.通过同源克隆法克隆到大黄鱼肝脏表达的抗菌肽2(liver-expressed antimicrobial peptide-2,LEAP-2)基因的完整开放阅读框(Opening Reading Frame,ORF).克隆到的大黄鱼LEAP-2全长2236 bp,包含外显子Ⅰ78 bp,内含子Ⅰ880 bp,外显子Ⅱ179 bp,内含子Ⅱ1044 bp,外显子Ⅲ55 bp,编码序列312 bp,编码103个氨基酸.推断的氨基酸序列羧基端区域存在高度保守的4 个半胱氨酸残基,符合LEAP-2超家族的结构特征.同源性对比后显示LEAP-2基因在进化上高度保守,大黄鱼LEAP-2推断的氨基酸序列与牙鲆、黄颡鱼、蓝色鲶鱼和斑点叉尾鮰等鱼类之间的同源性均在95%以上.将大黄鱼LEAP-2 cDNA连接到pET-32a(+),构建了重组表达质粒pET-32a-LEAP-2,将其转化到大肠杆菌BL21上并用1.0 mmol/L IPTG诱导表达,获得了大小约为27 kDa的重组蛋白,与预期的一致.
항균태시재다충세포중표체구유항균활성적태류물질적총칭,재면역반응중발휘착비상중요적작용.통과동원극륭법극륭도대황어간장표체적항균태2(liver-expressed antimicrobial peptide-2,LEAP-2)기인적완정개방열독광(Opening Reading Frame,ORF).극륭도적대황어LEAP-2전장2236 bp,포함외현자Ⅰ78 bp,내함자Ⅰ880 bp,외현자Ⅱ179 bp,내함자Ⅱ1044 bp,외현자Ⅲ55 bp,편마서렬312 bp,편마103개안기산.추단적안기산서렬최기단구역존재고도보수적4 개반광안산잔기,부합LEAP-2초가족적결구특정.동원성대비후현시LEAP-2기인재진화상고도보수,대황어LEAP-2추단적안기산서렬여아평、황상어、람색염어화반점차미회등어류지간적동원성균재95%이상.장대황어LEAP-2 cDNA련접도pET-32a(+),구건료중조표체질립pET-32a-LEAP-2,장기전화도대장간균BL21상병용1.0 mmol/L IPTG유도표체,획득료대소약위27 kDa적중조단백,여예기적일치.