中华血液学杂志
中華血液學雜誌
중화혈액학잡지
Chinese Journal of Hematology
2003年
12期
640-643
,共4页
陈元仲%吴勇%梁敏%李乃农%张昭秀%吕联煌
陳元仲%吳勇%樑敏%李迺農%張昭秀%呂聯煌
진원중%오용%량민%리내농%장소수%려련황
基因,p53%细胞系,HL-60%细胞系,K562%细胞凋亡%造血细胞生长因子
基因,p53%細胞繫,HL-60%細胞繫,K562%細胞凋亡%造血細胞生長因子
기인,p53%세포계,HL-60%세포계,K562%세포조망%조혈세포생장인자
目的探讨p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中内源性TGF-β1、TNF-α、端粒酶活性、Bcl-2表达的改变及其意义.方法利用脂质体将温敏型p53基因[pN53cG(Val135)]导入p53基因缺失的白血病细胞系HL-60、K562细胞,经G418筛选,获得稳定表达P53蛋白的抗性克隆细胞HL-60 pN53cG,K562-pN53cG细胞.采用缺口末端标记法、片段化DNA分析、RT-PCR、定量PCR、ELISA、PCR-ELISA、流式细胞术等方法检测外源性p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中TGF-β1、TNF-α、bcl-2、端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA表达变化、细胞上清TGF-β1水平和端粒酶活性及TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS对白血病细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响.结果①外源性野生型p53基因诱导细胞凋亡过程中内源性TGF-β1和TNF-α mRNA表达上调,bcl-2及hTERT mRNA表达下调,细胞培养上清TGF-β1蛋白水平明显升高,端粒酶活性水平下降;②TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS能够明显抑制野生型p53基因诱导细胞凋亡的发生,并使细胞bcl-2 mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平.结论 p53基因诱导白血病细胞凋亡可通过上调内源性TGF-β1和TNF-α水平,下调hTERT mRNA表达及端粒酶活性,抑制bcl-2基因表达而发挥作用.
目的探討p53基因誘導白血病細胞凋亡過程中內源性TGF-β1、TNF-α、耑粒酶活性、Bcl-2錶達的改變及其意義.方法利用脂質體將溫敏型p53基因[pN53cG(Val135)]導入p53基因缺失的白血病細胞繫HL-60、K562細胞,經G418篩選,穫得穩定錶達P53蛋白的抗性剋隆細胞HL-60 pN53cG,K562-pN53cG細胞.採用缺口末耑標記法、片段化DNA分析、RT-PCR、定量PCR、ELISA、PCR-ELISA、流式細胞術等方法檢測外源性p53基因誘導白血病細胞凋亡過程中TGF-β1、TNF-α、bcl-2、耑粒酶反轉錄酶(hTERT)mRNA錶達變化、細胞上清TGF-β1水平和耑粒酶活性及TGF-β1、TNF-α反義PS-ODNS對白血病細胞凋亡和Bcl-2蛋白錶達的影響.結果①外源性野生型p53基因誘導細胞凋亡過程中內源性TGF-β1和TNF-α mRNA錶達上調,bcl-2及hTERT mRNA錶達下調,細胞培養上清TGF-β1蛋白水平明顯升高,耑粒酶活性水平下降;②TGF-β1、TNF-α反義PS-ODNS能夠明顯抑製野生型p53基因誘導細胞凋亡的髮生,併使細胞bcl-2 mRNA及蛋白錶達恢複到處理前的水平.結論 p53基因誘導白血病細胞凋亡可通過上調內源性TGF-β1和TNF-α水平,下調hTERT mRNA錶達及耑粒酶活性,抑製bcl-2基因錶達而髮揮作用.
목적탐토p53기인유도백혈병세포조망과정중내원성TGF-β1、TNF-α、단립매활성、Bcl-2표체적개변급기의의.방법이용지질체장온민형p53기인[pN53cG(Val135)]도입p53기인결실적백혈병세포계HL-60、K562세포,경G418사선,획득은정표체P53단백적항성극륭세포HL-60 pN53cG,K562-pN53cG세포.채용결구말단표기법、편단화DNA분석、RT-PCR、정량PCR、ELISA、PCR-ELISA、류식세포술등방법검측외원성p53기인유도백혈병세포조망과정중TGF-β1、TNF-α、bcl-2、단립매반전록매(hTERT)mRNA표체변화、세포상청TGF-β1수평화단립매활성급TGF-β1、TNF-α반의PS-ODNS대백혈병세포조망화Bcl-2단백표체적영향.결과①외원성야생형p53기인유도세포조망과정중내원성TGF-β1화TNF-α mRNA표체상조,bcl-2급hTERT mRNA표체하조,세포배양상청TGF-β1단백수평명현승고,단립매활성수평하강;②TGF-β1、TNF-α반의PS-ODNS능구명현억제야생형p53기인유도세포조망적발생,병사세포bcl-2 mRNA급단백표체회복도처리전적수평.결론 p53기인유도백혈병세포조망가통과상조내원성TGF-β1화TNF-α수평,하조hTERT mRNA표체급단립매활성,억제bcl-2기인표체이발휘작용.
