细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2004年
5期
526-529
,共4页
袁慧君%扈荣良%包世俊%张守峰
袁慧君%扈榮良%包世俊%張守峰
원혜군%호영량%포세준%장수봉
IL -18%犬%克隆%测序%免疫学特性
IL -18%犬%剋隆%測序%免疫學特性
IL -18%견%극륭%측서%면역학특성
目的: 获得犬白介素-18(cIL-18)基因并探讨其作为基因疫苗佐剂的免疫效果.方法: 从犬的外周血中分离白细胞, 经ConA刺激培养5～12 h.提取犬白细胞总RNA作为模板, 通过RT-PCR技术扩增cIL-18 cDNA.将其克隆到载体pMD18-T中测序, 并与已发表的序列进行比较.将cIL-18 cDNA克隆入pIRES1neo中, 构建cIL-18真核表达载体.以200 μg∶200 μg的比例, 与狂犬病病毒糖蛋白表达载体pIGneo混合免疫犬, 并与糖蛋白单独免疫犬的免疫应答进行比较.结果: 扩增获得单一长约0.6 kb核酸带, 测序证明长度为582 bp, 编码193个氨基酸, 与从犬肺巨噬细胞中扩增的cIL-18基因的序列完全一致.以构建的表达载体pIIL18与pIGneo混合免疫与用pIGneo单独免疫相比较, 前者抗狂犬病病毒特异性抗体的水平显著低于后者; 但混合免疫组犬外周血淋巴细胞对特异性和非特异性抗原刺激的反应性显著高于糖蛋白单独免疫组.结论: cIL-18全长为582 bp, 其真核表达载体具有增强细胞免疫应答的能力, 同时可显著抑制体液免疫应答.本研究为cIL-18作为基因疫苗佐剂的研究奠定了基础.
目的: 穫得犬白介素-18(cIL-18)基因併探討其作為基因疫苗佐劑的免疫效果.方法: 從犬的外週血中分離白細胞, 經ConA刺激培養5～12 h.提取犬白細胞總RNA作為模闆, 通過RT-PCR技術擴增cIL-18 cDNA.將其剋隆到載體pMD18-T中測序, 併與已髮錶的序列進行比較.將cIL-18 cDNA剋隆入pIRES1neo中, 構建cIL-18真覈錶達載體.以200 μg∶200 μg的比例, 與狂犬病病毒糖蛋白錶達載體pIGneo混閤免疫犬, 併與糖蛋白單獨免疫犬的免疫應答進行比較.結果: 擴增穫得單一長約0.6 kb覈痠帶, 測序證明長度為582 bp, 編碼193箇氨基痠, 與從犬肺巨噬細胞中擴增的cIL-18基因的序列完全一緻.以構建的錶達載體pIIL18與pIGneo混閤免疫與用pIGneo單獨免疫相比較, 前者抗狂犬病病毒特異性抗體的水平顯著低于後者; 但混閤免疫組犬外週血淋巴細胞對特異性和非特異性抗原刺激的反應性顯著高于糖蛋白單獨免疫組.結論: cIL-18全長為582 bp, 其真覈錶達載體具有增彊細胞免疫應答的能力, 同時可顯著抑製體液免疫應答.本研究為cIL-18作為基因疫苗佐劑的研究奠定瞭基礎.
목적: 획득견백개소-18(cIL-18)기인병탐토기작위기인역묘좌제적면역효과.방법: 종견적외주혈중분리백세포, 경ConA자격배양5～12 h.제취견백세포총RNA작위모판, 통과RT-PCR기술확증cIL-18 cDNA.장기극륭도재체pMD18-T중측서, 병여이발표적서렬진행비교.장cIL-18 cDNA극륭입pIRES1neo중, 구건cIL-18진핵표체재체.이200 μg∶200 μg적비례, 여광견병병독당단백표체재체pIGneo혼합면역견, 병여당단백단독면역견적면역응답진행비교.결과: 확증획득단일장약0.6 kb핵산대, 측서증명장도위582 bp, 편마193개안기산, 여종견폐거서세포중확증적cIL-18기인적서렬완전일치.이구건적표체재체pIIL18여pIGneo혼합면역여용pIGneo단독면역상비교, 전자항광견병병독특이성항체적수평현저저우후자; 단혼합면역조견외주혈림파세포대특이성화비특이성항원자격적반응성현저고우당단백단독면역조.결론: cIL-18전장위582 bp, 기진핵표체재체구유증강세포면역응답적능력, 동시가현저억제체액면역응답.본연구위cIL-18작위기인역묘좌제적연구전정료기출.
