局解手术学杂志
跼解手術學雜誌
국해수술학잡지
JOURNAL OF REGIONAL ANATOMY AND OPERATIVE SURGERY
2005年
2期
91-93
,共3页
MIP-3α%融合表达%载体%Western blot%蛋白纯化
MIP-3α%融閤錶達%載體%Western blot%蛋白純化
MIP-3α%융합표체%재체%Western blot%단백순화
目的克隆人趋化因子MIP-3α基因,表达并初步纯化MIP-3α融合蛋白.方法从扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3α成熟蛋白基因,并在5'和3'分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli.DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得MIP-3α天然蛋白表达载体pET32a(+)/MIP-3α,SDS-PAGE分析其表达,Western blot验证融合蛋白.大量表达并初步纯化MIP-3α融合蛋白.结果成功克隆了MIP-3α基因,表达并初步纯化得到MIP-3α融合蛋白.结论构建的MIP-3α硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式表达MIP-3α硫氧还蛋白.
目的剋隆人趨化因子MIP-3α基因,錶達併初步純化MIP-3α融閤蛋白.方法從扁桃體中提取總RNA,再進行RT-PCR,擴增MIP-3α成熟蛋白基因,併在5'和3'分彆添加NcoI和EcoRI酶切位點,通過這兩箇酶切位點重組于pET32a(+)載體上,轉化E.coli.DH5α,篩選暘性剋隆,酶切鑒定,DNA測序檢測插入序列的正確性,缺失突變穫得MIP-3α天然蛋白錶達載體pET32a(+)/MIP-3α,SDS-PAGE分析其錶達,Western blot驗證融閤蛋白.大量錶達併初步純化MIP-3α融閤蛋白.結果成功剋隆瞭MIP-3α基因,錶達併初步純化得到MIP-3α融閤蛋白.結論構建的MIP-3α硫氧還蛋白融閤錶達載體以可溶性蛋白的方式錶達MIP-3α硫氧還蛋白.
목적극륭인추화인자MIP-3α기인,표체병초보순화MIP-3α융합단백.방법종편도체중제취총RNA,재진행RT-PCR,확증MIP-3α성숙단백기인,병재5'화3'분별첨가NcoI화EcoRI매절위점,통과저량개매절위점중조우pET32a(+)재체상,전화E.coli.DH5α,사선양성극륭,매절감정,DNA측서검측삽입서렬적정학성,결실돌변획득MIP-3α천연단백표체재체pET32a(+)/MIP-3α,SDS-PAGE분석기표체,Western blot험증융합단백.대량표체병초보순화MIP-3α융합단백.결과성공극륭료MIP-3α기인,표체병초보순화득도MIP-3α융합단백.결론구건적MIP-3α류양환단백융합표체재체이가용성단백적방식표체MIP-3α류양환단백.
