CAJ | 학술논문

目的利用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量方法.方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线.以副溶血弧菌菌株8株及同源、非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测.同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测.结果该方法有良好的特异性:8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其它24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,16株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性:阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间相关系数达到0.9871.在纯培养的条件下,其检测低限为10cfu/ml.对32个模拟样本直接进行定量检测,则检测低限在102cfu/g;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfu/g.结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景.
목적이용형광정량PCR기술,연제괄합각층차실험실사용적,쾌속、준학지검측감정식품중부용혈호균오염적정성、정량방법.방법근거부용혈호균gyrase기인서렬,설계병합성특이성인물화형광표기탐침,장확증후적특이편단제성양성모판,회제표준곡선.이부용혈호균균주8주급동원、비동원삼고균주24주,주특이성검측;장양성오염균안제도가입음성양품위모의양본,주민감성검측.동시사용PE7000형정량PCR의화국산DA620미량형광검측의검측.결과해방법유량호적특이성:8주부용혈호균결과균위양성,이기타24주균주균위음성(기중8주시호균과,16주분별래자불동적균속);해방법유량호적민감성:양성모판농도여정량곡선순배역치지간상관계수체도0.9871.재순배양적조건하,기검측저한위10cfu/ml.대32개모의양본직접진행정량검측,칙검측저한재102cfu/g;경과24소시증균배양,검측저한가체2cfu/g.결론해방법특이성강、민감성고,조작간편쾌속,능피면상규PCR방법역오염적결함,재국산의기상측시동양취득교호적민감성화특이성,편우기층실험실사용,구유흔호적추엄응용전경.