中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2006年
1期
76-80
,共5页
卢受昇%余业东%廖明%任涛%孙彦伟%罗开健%张桂红%辛朝安
盧受昇%餘業東%廖明%任濤%孫彥偉%囉開健%張桂紅%辛朝安
로수승%여업동%료명%임도%손언위%라개건%장계홍%신조안
H5亚型禽流感%间接免疫荧光%快速诊断
H5亞型禽流感%間接免疫熒光%快速診斷
H5아형금류감%간접면역형광%쾌속진단
本研究以当前严重威胁我国养禽业的高致病性禽流感H5亚型病毒为研究对象,病毒在犬肾细胞(MDCK)上培养增殖,经蔗糖梯度离心对病毒进行纯化,免疫清洁级的新西兰公兔,高免血清经辛酸-硫酸铵法和葡聚糖G50柱纯化,制得第一抗体.以FITC标记的山羊抗兔IgG为第二抗体,通过反应条件的优化,建立了间接免疫荧光快速诊断方法.本法的最佳检测组织为心肌和胰腺,检测时间只需3小时,本法可检出人工感染后36小时尚未表现出临床症状鸡只中的病毒,对禽流感H7亚型、H9亚型病、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎禽出败等病料进行特异性检验结果均为阴性.运用本方法对69个禽场的临床病料进行了检测,检测结果与鸡胚分离法进行比对,9个阳性场(广东省2004年9个原疫点的病料)的9份病料中,检出8份阳性;而鸡胚分离法阴性样品,本法检测结果与之完全相符.本法用于禽流感H5亚型病毒的快速诊断具有快速、简便、敏感、特异、费用低廉和不存在交叉污染等优点,在当前流行的H5亚型高致病性禽流感快速诊断中具有良好的应用前景.
本研究以噹前嚴重威脅我國養禽業的高緻病性禽流感H5亞型病毒為研究對象,病毒在犬腎細胞(MDCK)上培養增殖,經蔗糖梯度離心對病毒進行純化,免疫清潔級的新西蘭公兔,高免血清經辛痠-硫痠銨法和葡聚糖G50柱純化,製得第一抗體.以FITC標記的山羊抗兔IgG為第二抗體,通過反應條件的優化,建立瞭間接免疫熒光快速診斷方法.本法的最佳檢測組織為心肌和胰腺,檢測時間隻需3小時,本法可檢齣人工感染後36小時尚未錶現齣臨床癥狀鷄隻中的病毒,對禽流感H7亞型、H9亞型病、新城疫、傳染性支氣管炎和傳染性喉氣管炎禽齣敗等病料進行特異性檢驗結果均為陰性.運用本方法對69箇禽場的臨床病料進行瞭檢測,檢測結果與鷄胚分離法進行比對,9箇暘性場(廣東省2004年9箇原疫點的病料)的9份病料中,檢齣8份暘性;而鷄胚分離法陰性樣品,本法檢測結果與之完全相符.本法用于禽流感H5亞型病毒的快速診斷具有快速、簡便、敏感、特異、費用低廉和不存在交扠汙染等優點,在噹前流行的H5亞型高緻病性禽流感快速診斷中具有良好的應用前景.
본연구이당전엄중위협아국양금업적고치병성금류감H5아형병독위연구대상,병독재견신세포(MDCK)상배양증식,경자당제도리심대병독진행순화,면역청길급적신서란공토,고면혈청경신산-류산안법화포취당G50주순화,제득제일항체.이FITC표기적산양항토IgG위제이항체,통과반응조건적우화,건립료간접면역형광쾌속진단방법.본법적최가검측조직위심기화이선,검측시간지수3소시,본법가검출인공감염후36소시상미표현출림상증상계지중적병독,대금류감H7아형、H9아형병、신성역、전염성지기관염화전염성후기관염금출패등병료진행특이성검험결과균위음성.운용본방법대69개금장적림상병료진행료검측,검측결과여계배분리법진행비대,9개양성장(광동성2004년9개원역점적병료)적9빈병료중,검출8빈양성;이계배분리법음성양품,본법검측결과여지완전상부.본법용우금류감H5아형병독적쾌속진단구유쾌속、간편、민감、특이、비용저렴화불존재교차오염등우점,재당전류행적H5아형고치병성금류감쾌속진단중구유량호적응용전경.
