CAJ | 학술논문

为从细胞水平建立大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧/复氧模型,观察了盐酸戊乙奎醚对心肌微血管内皮细胞的H/R损伤的保护作用.实验采用酶消化法进行细胞的原代培养,1∶ 2传代.采用荧光标记乙酰化Dil-Ac-LDL的方法鉴定.培养的细胞随机分为4组;①对照组,常氧环境下培养,不给予任何处理;② H/R组,改培养液为D-Hank,s液,于37℃、5%CO2、95%N2 密闭缺氧鑵内培养2 h后,弃D-Hank,s液,改为完全培养液,放入常氧培养箱中继续培养4 h;③ PHC预处理组,在细胞缺氧2 h前给予PHC(终浓度为0.1 μm·L-1)预处理,④ H/R +PHC组,在细胞H/R后,给予PHC(终浓度为0.1 μm·L-1)孵育2 h.MTT自动比色法测细胞活力,流式细胞法检测细胞凋亡.结果是:① 成功培养大鼠心肌微血管内皮细胞,用荧光标记乙酰化Dil-Ac-LDL的方法鉴定为微血管内皮细胞.② 成功制备出微血管内皮细胞的H/R模型将试验细胞培养液改为D-Hank,s 液,置于37℃、5%CO2、92%N2 密闭缺氧罐中环缺氧2 h,后改为完全培养液放入常氧培养箱中继续培养4 h,可制备出微血管内皮细胞的I/R模型.③ H/R组细胞死亡率和凋亡率与对照组相比明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),PHC+H/R组的细胞死亡率和凋亡率下降,差异有统计学意义(P<0.05),H/R+PHC组与对照组相比,虽然细胞的死亡率和凋亡率有所下降,但差异没有统计学意义(P>0.05).结论是:PHC预处理对大鼠微血管内皮细胞的H/RI有保护作用.
위종세포수평건립대서심기미혈관내피세포결양/복양모형,관찰료염산무을규미대심기미혈관내피세포적H/R손상적보호작용.실험채용매소화법진행세포적원대배양,1∶ 2전대.채용형광표기을선화Dil-Ac-LDL적방법감정.배양적세포수궤분위4조;①대조조,상양배경하배양,불급여임하처리;② H/R조,개배양액위D-Hank,s액,우37℃、5%CO2、95%N2 밀폐결양관내배양2 h후,기D-Hank,s액,개위완전배양액,방입상양배양상중계속배양4 h;③ PHC예처리조,재세포결양2 h전급여PHC(종농도위0.1 μm·L-1)예처리,④ H/R +PHC조,재세포H/R후,급여PHC(종농도위0.1 μm·L-1)부육2 h.MTT자동비색법측세포활력,류식세포법검측세포조망.결과시:① 성공배양대서심기미혈관내피세포,용형광표기을선화Dil-Ac-LDL적방법감정위미혈관내피세포.② 성공제비출미혈관내피세포적H/R모형장시험세포배양액개위D-Hank,s 액,치우37℃、5%CO2、92%N2 밀폐결양관중배결양2 h,후개위완전배양액방입상양배양상중계속배양4 h,가제비출미혈관내피세포적I/R모형.③ H/R조세포사망솔화조망솔여대조조상비명현증고,차이유통계학의의(P<0.01),PHC+H/R조적세포사망솔화조망솔하강,차이유통계학의의(P<0.05),H/R+PHC조여대조조상비,수연세포적사망솔화조망솔유소하강,단차이몰유통계학의의(P>0.05).결론시:PHC예처리대대서미혈관내피세포적H/RI유보호작용.