西北药学杂志
西北藥學雜誌
서북약학잡지
2010年
3期
206-208
,共3页
杨亚男%鲁勇%刘景晶%曹荣月
楊亞男%魯勇%劉景晶%曹榮月
양아남%로용%류경정%조영월
基因工程%重组人胰岛素%纯化%磺酸化
基因工程%重組人胰島素%純化%磺痠化
기인공정%중조인이도소%순화%광산화
目的 对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-IHI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法 对包涵体蛋白纯化复性的工艺.方法 工程菌pET28a-IHI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化后采用15%SDS-PAGE电泳检测,经过复性,酶切,DEAE-52纯化后,冷冻干爆,样品进行HPLC检测以及整体生物学活性实验.结果工程菌表达量约在30%左右,经过三步纯化,包涵体纯度可达98%以上,酶切之后经质谱检测,与人胰岛素标准品相对分子质量一致,而且动物实验降血糖效果明显,1 L发酵液最终可得到人胰岛素140mg.结论 该工艺耗时短,效果好,成本较低.
目的 對含有重組人胰島素原基因的大腸桿菌工程菌pET28a-IHI搖瓶髮酵,併探討採用磺痠化方法 對包涵體蛋白純化複性的工藝.方法 工程菌pET28a-IHI經搖瓶髮酵、機械破碎得到包涵體,包涵體經過磺痠化、等電點沉澱、DEAE-52柱層析三步純化後採用15%SDS-PAGE電泳檢測,經過複性,酶切,DEAE-52純化後,冷凍榦爆,樣品進行HPLC檢測以及整體生物學活性實驗.結果工程菌錶達量約在30%左右,經過三步純化,包涵體純度可達98%以上,酶切之後經質譜檢測,與人胰島素標準品相對分子質量一緻,而且動物實驗降血糖效果明顯,1 L髮酵液最終可得到人胰島素140mg.結論 該工藝耗時短,效果好,成本較低.
목적 대함유중조인이도소원기인적대장간균공정균pET28a-IHI요병발효,병탐토채용광산화방법 대포함체단백순화복성적공예.방법 공정균pET28a-IHI경요병발효、궤계파쇄득도포함체,포함체경과광산화、등전점침정、DEAE-52주층석삼보순화후채용15%SDS-PAGE전영검측,경과복성,매절,DEAE-52순화후,냉동간폭,양품진행HPLC검측이급정체생물학활성실험.결과공정균표체량약재30%좌우,경과삼보순화,포함체순도가체98%이상,매절지후경질보검측,여인이도소표준품상대분자질량일치,이차동물실험강혈당효과명현,1 L발효액최종가득도인이도소140mg.결론 해공예모시단,효과호,성본교저.
