中国临床神经科学
中國臨床神經科學
중국림상신경과학
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL NEUROSCIENCES
2011年
4期
402-407
,共6页
人肌肉生长抑素%质粒%基因重组%原核表达%蛋白纯化
人肌肉生長抑素%質粒%基因重組%原覈錶達%蛋白純化
인기육생장억소%질립%기인중조%원핵표체%단백순화
目的:克隆人肌肉生长抑素(myostatin)基因并在大肠埃希菌中表达,纯化目的蛋白后制成冻干粉剂.方法:通过RT-PCR方法得到人myostatin基因的cDNA序列,构建重组克隆质粒pGEM5zf(+)myostatin-s及表达质粒pET32a (+)-myostatin-s,在合适条件下通过大肠埃希菌表达系统诱导表达并纯化该蛋白(myostatin-s),最终制成冻干粉剂.结果:成功构建重组质粒,并经测序与GeneBank资料Myostatin (GI:2623581)序列完全一致.经异丙基-b-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导及纯化获得相对分子质量为33 000融合蛋白,并经Western blot证实后制成冻干粉剂.结论:通过重组基因片段可以获得纯化myostatin的成熟肽片段-融合蛋白myostatin-s,制成的冻干粉剂将为进一步人肌肉生长抑素免疫学研究奠定基础.
目的:剋隆人肌肉生長抑素(myostatin)基因併在大腸埃希菌中錶達,純化目的蛋白後製成凍榦粉劑.方法:通過RT-PCR方法得到人myostatin基因的cDNA序列,構建重組剋隆質粒pGEM5zf(+)myostatin-s及錶達質粒pET32a (+)-myostatin-s,在閤適條件下通過大腸埃希菌錶達繫統誘導錶達併純化該蛋白(myostatin-s),最終製成凍榦粉劑.結果:成功構建重組質粒,併經測序與GeneBank資料Myostatin (GI:2623581)序列完全一緻.經異丙基-b-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導及純化穫得相對分子質量為33 000融閤蛋白,併經Western blot證實後製成凍榦粉劑.結論:通過重組基因片段可以穫得純化myostatin的成熟肽片段-融閤蛋白myostatin-s,製成的凍榦粉劑將為進一步人肌肉生長抑素免疫學研究奠定基礎.
목적:극륭인기육생장억소(myostatin)기인병재대장애희균중표체,순화목적단백후제성동간분제.방법:통과RT-PCR방법득도인myostatin기인적cDNA서렬,구건중조극륭질립pGEM5zf(+)myostatin-s급표체질립pET32a (+)-myostatin-s,재합괄조건하통과대장애희균표체계통유도표체병순화해단백(myostatin-s),최종제성동간분제.결과:성공구건중조질립,병경측서여GeneBank자료Myostatin (GI:2623581)서렬완전일치.경이병기-b-D-류대필남반유당감(IPTG)유도급순화획득상대분자질량위33 000융합단백,병경Western blot증실후제성동간분제.결론:통과중조기인편단가이획득순화myostatin적성숙태편단-융합단백myostatin-s,제성적동간분제장위진일보인기육생장억소면역학연구전정기출.
