泸州医学院学报
瀘州醫學院學報
로주의학원학보
JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE
2011年
5期
471-474
,共4页
年四季%张金平%高燕%杨燕%向丽%袁青
年四季%張金平%高燕%楊燕%嚮麗%袁青
년사계%장금평%고연%양연%향려%원청
IL-33%融合表达%纯化
IL-33%融閤錶達%純化
IL-33%융합표체%순화
目的:构建人白介素-33（IL-33）硫氧还蛋白融合表达载体,高效表达IL-33蛋白.方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞( PBMC) mRNA中扩增IL-33 cDNA；将扩增的IL-33目的基因与融合表达质粒pET102/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定.结果:扩增的IL-33 cDNA大小为800bp左右.表达的IL-33融合蛋白大小为45kDa左右,Western blotting鉴定显示表达的蛋白正确,为IL-33目的蛋白.但表达的大部分蛋白为无生物学活性的包涵体,在后续对表达蛋白进行纯化的同时对蛋白进行了复性,得到了复性后具有生物学活性的IL-33蛋白.结论:成功制备了具有生物学活性的IL-33蛋白.
目的:構建人白介素-33（IL-33）硫氧還蛋白融閤錶達載體,高效錶達IL-33蛋白.方法:採用RT-PCR從健康誌願者外週血單覈細胞( PBMC) mRNA中擴增IL-33 cDNA；將擴增的IL-33目的基因與融閤錶達質粒pET102/D-TOPO連接,轉化大腸桿菌BL21,IPTG誘導錶達併對錶達產物進行純化鑒定.結果:擴增的IL-33 cDNA大小為800bp左右.錶達的IL-33融閤蛋白大小為45kDa左右,Western blotting鑒定顯示錶達的蛋白正確,為IL-33目的蛋白.但錶達的大部分蛋白為無生物學活性的包涵體,在後續對錶達蛋白進行純化的同時對蛋白進行瞭複性,得到瞭複性後具有生物學活性的IL-33蛋白.結論:成功製備瞭具有生物學活性的IL-33蛋白.
목적:구건인백개소-33（IL-33）류양환단백융합표체재체,고효표체IL-33단백.방법:채용RT-PCR종건강지원자외주혈단핵세포( PBMC) mRNA중확증IL-33 cDNA；장확증적IL-33목적기인여융합표체질립pET102/D-TOPO련접,전화대장간균BL21,IPTG유도표체병대표체산물진행순화감정.결과:확증적IL-33 cDNA대소위800bp좌우.표체적IL-33융합단백대소위45kDa좌우,Western blotting감정현시표체적단백정학,위IL-33목적단백.단표체적대부분단백위무생물학활성적포함체,재후속대표체단백진행순화적동시대단백진행료복성,득도료복성후구유생물학활성적IL-33단백.결론:성공제비료구유생물학활성적IL-33단백.
