南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
3期
341-344,348
,共5页
陈可和%梁博%邹镇洪%韩泽龙%潘金飞%刘安玲
陳可和%樑博%鄒鎮洪%韓澤龍%潘金飛%劉安玲
진가화%량박%추진홍%한택룡%반금비%류안령
Rheb%慢病毒载体%MCF-7细胞株%乳腺癌%SK-HEP-1细胞株%肝细胞癌
Rheb%慢病毒載體%MCF-7細胞株%乳腺癌%SK-HEP-1細胞株%肝細胞癌
Rheb%만병독재체%MCF-7세포주%유선암%SK-HEP-1세포주%간세포암
目的 构建携带Rheb和Rheb'D60K突变基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在MCF-7细胞中的表达效果,观察其对肝癌细胞凋亡的影响.方法 PCR法扩增Rheb和Rheb'D60K突变基因,构建重组质粒LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K,脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染HEK-293 FT细胞,包装产生慢病毒颗粒.将病毒感染MCF-7细胞后Western blotting检测Rheb及PS6蛋白的表达；将病毒感染SK-HEP-1细胞饥饿处理后观察其凋亡情况.结果 PCR及测序表明成功构建了LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K重组慢病毒载体.Western blotting结果显示慢病毒LV31-Rheb-WT感染的MCF-7细胞内Rheb下游的PS6蛋白表达多于慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的MCF-7细胞.显微镜下慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的SK-HEP-1细胞饥饿后凋亡数目多于慢病毒LV31-Rheb-WT感染的SK-HEP-1细胞.结论 本研究成功构建了Rheb和Rheb'D60K突变基因重组慢病毒载体,初步观察到该突变基因重组慢病毒载体可诱导肝癌细胞凋亡,为进一步研究Rheb基因在肝癌发生发展中的作用,进而开展肝癌的临床靶向治疗研究奠定了基础.
目的 構建攜帶Rheb和Rheb'D60K突變基因的重組慢病毒載體,併鑒定其在MCF-7細胞中的錶達效果,觀察其對肝癌細胞凋亡的影響.方法 PCR法擴增Rheb和Rheb'D60K突變基因,構建重組質粒LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K,脂質體法將重組慢病毒載體和包裝質粒混閤物共轉染HEK-293 FT細胞,包裝產生慢病毒顆粒.將病毒感染MCF-7細胞後Western blotting檢測Rheb及PS6蛋白的錶達；將病毒感染SK-HEP-1細胞饑餓處理後觀察其凋亡情況.結果 PCR及測序錶明成功構建瞭LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K重組慢病毒載體.Western blotting結果顯示慢病毒LV31-Rheb-WT感染的MCF-7細胞內Rheb下遊的PS6蛋白錶達多于慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的MCF-7細胞.顯微鏡下慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的SK-HEP-1細胞饑餓後凋亡數目多于慢病毒LV31-Rheb-WT感染的SK-HEP-1細胞.結論 本研究成功構建瞭Rheb和Rheb'D60K突變基因重組慢病毒載體,初步觀察到該突變基因重組慢病毒載體可誘導肝癌細胞凋亡,為進一步研究Rheb基因在肝癌髮生髮展中的作用,進而開展肝癌的臨床靶嚮治療研究奠定瞭基礎.
목적 구건휴대Rheb화Rheb'D60K돌변기인적중조만병독재체,병감정기재MCF-7세포중적표체효과,관찰기대간암세포조망적영향.방법 PCR법확증Rheb화Rheb'D60K돌변기인,구건중조질립LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K,지질체법장중조만병독재체화포장질립혼합물공전염HEK-293 FT세포,포장산생만병독과립.장병독감염MCF-7세포후Western blotting검측Rheb급PS6단백적표체；장병독감염SK-HEP-1세포기아처리후관찰기조망정황.결과 PCR급측서표명성공구건료LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K중조만병독재체.Western blotting결과현시만병독LV31-Rheb-WT감염적MCF-7세포내Rheb하유적PS6단백표체다우만병독LV31-Rheb-D60K감염적MCF-7세포.현미경하만병독LV31-Rheb-D60K감염적SK-HEP-1세포기아후조망수목다우만병독LV31-Rheb-WT감염적SK-HEP-1세포.결론 본연구성공구건료Rheb화Rheb'D60K돌변기인중조만병독재체,초보관찰도해돌변기인중조만병독재체가유도간암세포조망,위진일보연구Rheb기인재간암발생발전중적작용,진이개전간암적림상파향치료연구전정료기출.
