中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2004年
6期
792-797
,共6页
王芳%顾奇伟%武家才%张传溪
王芳%顧奇偉%武傢纔%張傳溪
왕방%고기위%무가재%장전계
HaSNPV%几丁质酶%原核表达%真核表达%Bt杀虫剂%增效作用
HaSNPV%幾丁質酶%原覈錶達%真覈錶達%Bt殺蟲劑%增效作用
HaSNPV%궤정질매%원핵표체%진핵표체%Bt살충제%증효작용
为了探索杆状病毒几丁质酶对微生物杀虫剂的增效作用及其利用途径,分别在大肠杆菌和昆虫细胞中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒(HaSNPV)几丁质酶.用PCR方法扩增出不含N端信号肽编码序列的几丁质酶基因片段,并分别克隆至原核表达载体pET28a和重组到杆状病毒Bac to Bac表达系统,在大肠杆菌(E.coli)BL21和粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)细胞系Tn-5B1-4中分别进行了表达.在大肠杆菌中表达量约占细菌总蛋白15%,在昆虫细胞中表达量约占细胞总蛋白10%.将含有几丁质酶的大肠杆菌和昆虫细胞表达产物添加到苏云金杆菌(Bt)菌液中一起喂食2龄家蚕.结果显示,HaSNPV几丁质酶基因的2种表达产物和Bt杀虫剂的混合物使处理的家蚕的致死时间较对照处理均明显缩短.昆虫细胞和大肠杆菌表达产物与Bt混合物处理的LT50分别从93.5h和95.1 h缩短到56.2 h及67.2 h,并且供试家蚕的生长速度明显缓慢.研究结果表明,重组的HaSNPV几丁质酶有望作为Bt杀虫剂的增效剂.
為瞭探索桿狀病毒幾丁質酶對微生物殺蟲劑的增效作用及其利用途徑,分彆在大腸桿菌和昆蟲細胞中錶達棉鈴蟲單粒包埋型覈型多角體病毒(HaSNPV)幾丁質酶.用PCR方法擴增齣不含N耑信號肽編碼序列的幾丁質酶基因片段,併分彆剋隆至原覈錶達載體pET28a和重組到桿狀病毒Bac to Bac錶達繫統,在大腸桿菌(E.coli)BL21和粉紋夜蛾(Trichoplusia ni)細胞繫Tn-5B1-4中分彆進行瞭錶達.在大腸桿菌中錶達量約佔細菌總蛋白15%,在昆蟲細胞中錶達量約佔細胞總蛋白10%.將含有幾丁質酶的大腸桿菌和昆蟲細胞錶達產物添加到囌雲金桿菌(Bt)菌液中一起餵食2齡傢蠶.結果顯示,HaSNPV幾丁質酶基因的2種錶達產物和Bt殺蟲劑的混閤物使處理的傢蠶的緻死時間較對照處理均明顯縮短.昆蟲細胞和大腸桿菌錶達產物與Bt混閤物處理的LT50分彆從93.5h和95.1 h縮短到56.2 h及67.2 h,併且供試傢蠶的生長速度明顯緩慢.研究結果錶明,重組的HaSNPV幾丁質酶有望作為Bt殺蟲劑的增效劑.
위료탐색간상병독궤정질매대미생물살충제적증효작용급기이용도경,분별재대장간균화곤충세포중표체면령충단립포매형핵형다각체병독(HaSNPV)궤정질매.용PCR방법확증출불함N단신호태편마서렬적궤정질매기인편단,병분별극륭지원핵표체재체pET28a화중조도간상병독Bac to Bac표체계통,재대장간균(E.coli)BL21화분문야아(Trichoplusia ni)세포계Tn-5B1-4중분별진행료표체.재대장간균중표체량약점세균총단백15%,재곤충세포중표체량약점세포총단백10%.장함유궤정질매적대장간균화곤충세포표체산물첨가도소운금간균(Bt)균액중일기위식2령가잠.결과현시,HaSNPV궤정질매기인적2충표체산물화Bt살충제적혼합물사처리적가잠적치사시간교대조처리균명현축단.곤충세포화대장간균표체산물여Bt혼합물처리적LT50분별종93.5h화95.1 h축단도56.2 h급67.2 h,병차공시가잠적생장속도명현완만.연구결과표명,중조적HaSNPV궤정질매유망작위Bt살충제적증효제.
